环纹背带线虫PCR检测试剂盒厂家

​
注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
D-Leucine正庚烷 for HPLC, ≥99%(GC)2-苯基乙基 硫代异酸酯 99%

DL-Leucine二十一烷 AR,90%2-戊基呋喃 ≥98%, FG

BOC-L-Leucine二十一烷 分析标准品，≥99.5% (GC)3,5,5-*基己 ≥95%, Kosher

N-Acetyl-DL-Leucine二十一烷  >99.0%(GC)无氯化铜(Ⅱ) 98%

L-Lysine靛蓝 AR,90%烯缩二乙 96%

L-Lysine HCL靛红 ARN-氨基哌啶盐酸盐 97%

DL-Lysine mohydrochloride靛蓝二磺酸钠 96%，高纯级1-氨基环基盐酸盐 97%

D-Lysine HCL靛蓝二磺酸钠 Biological stain4-乙酰氨基环己酮 97%

DL-Lysine靛蓝二磺酸钠 AR，90.0%N-二苯甲基氮杂环丁烷-3- 98%

Poly-L-lysine hydrobromide甲酸异丁酯 Standard for GCN⁴-苯甲酰胞苷  98%

L-Methionine衣康酸 CP，99%六羰基铬 99%

D-Methionine丁酸异戊酯 GCS，≥99.5% (GC)N-Cbz-对氨基环己酮 97%

DL-Methionine异丁 Standard for GC, ≥99.5% (GC)1,2-环氧环戊烷 97%

L-Phenylalanine乙二胺四乙酸锌二钠 四合物 用于络合, ≥98%4,4-二甲氧基-2-丁酮  95%

D-Phenylalanine硅藻土G  TLC4,6-二氯-2-甲基嘧啶 98%

DL-Phenylalanine单组份卡尔费休试剂（测酮类样 2mg/ml，测量较小样品双羟甲基二酸二乙酯 97%

铁标准溶液（500mg/L,溶剂：1%盐酸）Phospho-Zap-70 (Tyr319)/Syk (Tyr352) AntibodyPDCD10  凋亡相关蛋白10抗体

铁标准溶液（100μg/mL(20°C)，基体:5%HCl）Phospho-Zap-70 (Tyr319)/Syk (Tyr352) AntibodyPDC6I/Alix  调亡诱导因子6相互作用蛋白/多巴胺受体相互作用蛋白4抗体

铟标准溶液（1000μg/ml,基体：1.0 mol/L 硝酸）Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser235/236) (D57.2.2E) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 700 Conjugate)PD-1/CD279  程序性死亡1抗体

铟标准溶液（100mg/L(20℃)，基体：1％HCl）DYRK1B AntibodyPCX/PODXL  足细胞特异蛋白抗体

锂标准溶液(1000μg/ml)Phospho-Zap-70 (Tyr493)/Syk (Tyr526) AntibodyPCSK9/NARC1  神经细胞凋亡调节转化蛋白1抗体（前蛋白转化酶枯草溶菌素9）

锂标准溶液(100mg/L,基体:1%HCl)Phospho-Zap-70 (Tyr493)/Syk (Tyr526) AntibodyPCNT/Pericentrin  中心粒周蛋白抗体

铅标准溶液(500mg/L,溶剂：1%硝酸)Zap-70 (99F2) Rabbit mAbPCNP  PEST含核蛋白抗体

铅标准溶液(100µg/mL,,基体:1%H3)Zap-70 (136F12) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)PCNA-Proliferation Marker  增殖细胞核抗原抗体

镧标准溶液(1000μg/ml)p70 S6 Kinase (49D7) Rabbit mAbPCNA(1C11)  小鼠增殖细胞核抗原单克隆抗体

镧标准溶液(1000μg/ml in 10% HCl)p70 S6 Kinase (49D7) Rabbit mAbPCNA [Proliferation Marker]  增殖细胞核抗原抗体
环纹背带线虫PCR检测试剂盒厂家铁蛋白Fe65样蛋白2抗体Koumine N-oxide中文名：别名：分子式：C20H22N2O2

β淀粉样蛋白前体蛋白结合蛋白2抗体Alstolenine中文名：别名：分子式：C31H34N2O7

早老素稳定因子样蛋白/γ分泌酶组件蛋白APH1抗体Mallorepine中文名：别名：分子式：C7H6N2O

肌侧索硬化症相关蛋白1抗体Rauvotetraphylline D中文名：别名：分子式：C24H26N2O3

β淀粉样前体蛋白结合蛋白2抗体（X11β）Peraksine中文名：别名：分子式：C19H22N2O2