乳突类圆线虫PCR检测试剂盒说明书

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注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
8-Hydroxyhyperforin 8,1-hemiacetal无乙 GR,99%乙酸铯  AR,99% metals basis

9R-10alpha-Hydroxyepigambogic acid盐酸  用于痕量分析, ≥37% (T)乙酸铯  99.9% metals basis

9S-10alpha-Hydroxyepigambogic acid氧化锌 99.999% metals basis乙酸铯  99.99% metals basis

11-Hydroxyjasmonic acid五氧 AR,95%无氯化锂 AR,99.0%

12-Hydroxyjasmonic acid2,2-偶氮二(2-甲基基咪) 97%乙酸锌，二 AR,99.0%

30-Hydroxygambogic acid偶氮二异戊 98%氧化锌 AR，99%

Acetamide, N-[1,1-bis[(acetyloxy)methyl]-3-(4-octylphenyl)propyl]-五硫化二锑 锑含量:66%硫酸锌,七  99.995% metals basis

Agomelatine乙酰胺 AR,99%碱式碳酸锌 AR,57.5%

Allicin乙酰胺 Standard for GC,≥99.5% (GC)硫酸铜，五 高纯级

Allitol乙酰胺 99.8%，升华纯化磺酸 70%溶液

Allura Red AC硝酸铝 九合物 AR,99.0%硫酸镍，七  GR，99%

alpha-L-Rhamse三氯化锑 AR，99%溴化镍 22.5%溶液

Amphotericin B五锑 CP（）溴化镍 99%

Alpha-Angelica lactone酮 96%（）氯化镍,六 AR，98%

Arachidonic acid皂土(膨润土) Bentone SD-1，适于中至低极性溶剂三氧化二钴 CP,98.5%

Aristolochic acid B磷酸三钙 CP,97%三氧化二钴 AR,99.0%

乙二胺四乙酸锌二钠 四合物Phospho-AMPKα1 (Ser485) (45F5) Rabbit mAbPhospho-beta-Arrestin 1(Ser412)  磷酸化β抑制蛋白1抗体

石蕊eIF3A AntibodyPhospho-Bcr(Tyr360)  磷酸化T淋巴细胞受体抗体

甲基橙(IND)Calpain 2 Large Subunit (M-type) AntibodyPhospho-Bcr(Tyr177)  磷酸化T淋巴细胞受体抗体

甲基红钠盐(IND)HDAC2 Antibodyphospho-Bcl-xL/BCL2L1(Thr115)  磷酸化Bcl-xL蛋白抗体

甲基红钠盐(ACS reagent,95 %)Phospho-Paxillin (Tyr118) Antibodyphospho-Bcl-xL/Bcl2L1 (Ser62)  磷酸化Bcl-xL(Ser62)抗体

间甲基红Paxillin AntibodyPhospho-Bcl-2(Thr129)  磷酸化Bcl-2抗体

紫脲酸铵(IND)PSMD2 (D6W7G) Rabbit mAbPhospho-Bcl-2(Ser70)  磷酸化Bcl-2抗体

紫脲酸铵(ACS)Phospho-cdc2 (Thr14) AntibodyPhospho-Bcl-2 (Thr56)  磷酸化Bcl-2抗体

甲基紫,龙胆紫Phospho-FGF Receptor 1 (Tyr766) (1E5) Rabbit mAbphospho-Bcl 10(Ser218)  磷酸化Bcl-10抗体

间酚PKCβII (D9S2U) Rabbit mAbphospho-BCAR1(Tyr410)  磷酸化癌抗雌激素耐药蛋白1
乳突类圆线虫PCR检测试剂盒说明书Cyclohexyl(dimethoxy)methylsilane,≥97...多肽试剂　25ML

Dimethoxydiphenylsilane,≥98.0%多肽试剂　25ML

Heptamethyldisilazane,≥97.0%多肽试剂　25ML

(3,3,3-Trifluoropropyl)methyldichloros...多肽试剂　5G

Potassium bromide多肽试剂　25G

Chlorotriethylsilane ,≥98.0%多肽试剂　25ML

Hexamethyldisilane,≥98.0%多肽试剂　10ML

3-Amipropyl(diethoxy)methylsilane, ...多肽试剂　50ML

N-[3-(Trimethoxysilyl)propyl]ethylened...多肽试剂　100ML

n-Propyltriethoxysilane多肽试剂　25ML

3-(2-Amiethylami)propyldimethoxyme...多肽试剂　25ML

3-Chloropropyltriethoxysilane,≥98.0%多肽试剂　100ML

3-Glycidyloxypropyltrimethoxysilane,≥...多肽试剂　25G

1,1,3,3-Tetramethyldisiloxane ,≥98.0%多肽试剂　25ML

Triacetoxy(methyl)silane ,≥90.0%多肽试剂　100ML