普氏立克次氏体PCR检测试剂盒价格

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

​

实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
Sodium Danshensu伏草隆 分析标准品磷钼酸铵 AR,96.5%

Puerarin氯甲酸异酯  97%三乙基苄基氯化铵 98%

Saikosaponin A异隆 分析标准品，99.5%磷钼酸 AR

Saikosaponin B1利谷隆 分析标准品聚烯酸钠 average Mw 500万-700万 ,80目

Saikosaponin C氯甲 98%（）聚烯酸钠 average Mw 400万-500万

Saikosaponin D绿谷隆 分析标准品四丁基溴化铵 AR,99.0%

Baicalin氯甲酸正酯 99%4-乙酰氧基苯甲酸  99%

Baicalein氯甲酸苯酯 98%4-基苯甲酸 98%

Scutellarin甲基托布津 分析标准品柠酸 97%(T)

Wogoside正  ACS, ≥99.5%4-乙 98%

Alkaline transfer solution2,4-二氯苯胺 99%L-(-)樟脑磺酸 99%

1-Ami-2-naphthol-4-sulfonic acid(S)-4-苄基-2-恶唑烷酮  99%D(+)樟脑磺酸  99%

Ammonium bitartrate(R)-4-苄基-2-恶唑烷酮   99%（±）-樟脑-10-磺酸 99%

Amygdalin乙酰氨基二酸二乙酯  98%甲基烯酸烯酯, 包含50-185 ppm MEHQ稳定剂, 98%

Phenylhydrazine hydrochloride对羟基苯酮  98%甲基烯酸苄基酯 98%

Azomethine-H mosodium salt hydrate(S)-4-异基-2-恶唑烷酮 98%二甲基烯酸1,3-丁二酯, 含200 ppm MEHQ稳定剂, 95%

十二烷基硫酸钠(分子生物学级)Toll-like Receptor 4 (D8L5W) Rabbit mAb (Mouse Specific)PIRH2  泛素连接酶抗体

聚乙二6000TrkA Blocking PeptidePinin  桥粒相关蛋白DRS抗体

吐温20MED12 (D9K5J) Rabbit mAbPin1  肽基脯氨酞顺反异构酶Pinl抗体

5-溴-4-氯-3-吲哚基-beta-D-葡糖苷酸环己胺盐(X-GLUC)IGF-II Receptor/CI-M6PR (D3V8C) Rabbit mAbPIM3  丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶PIM3抗体

曲拉通X-100Rab38 (D2V9Z) Rabbit mAbPIM1  丝氨酸/苏氨酸激酶蛋白Pim1抗体

胰蛋白胨COMT (D4N6M) Rabbit mAbPILR beta  细胞表面受体PILRβ抗体

生物素;D-生物素;维生素 H 辅酶 ROLFM4 (D1E4M) XP® Rabbit mAbPILR beta  细胞表面受体PILRβ抗体

甘油OLFM4 (D1E4M) XP® Rabbit mAbPIK3CA  磷脂酰肌激酶催化亚单位A抗体

柠檬酸钠二；柠檬酸三钠二Phospho-CDK Substrate [pTPXK] (D9V5N) Rabbit mAbPIK3C3/PI3 kinase type 3  磷脂酰肌激酶3催化亚单位3抗体

酸KPNA2 AntibodyPIH1D1/P17  核仁同源蛋白17抗体
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