立克次体通用PCR检测试剂盒说明书

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
​
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
Dimethylglyoxime disodium salt octahydrate2,4-二氯 98%二甲基烯酸甘油酯 90%

1,3-Diphenylurea对甲 97%甲基烯酸己酯 98%

Dithiooxamide对甲 ≥97%,Kosher二甲基烯酸1,6-己二酯 95%

Domoic acid对甲 99%二烯酸1,6-己二酯 90%

Ferene S3-氨基-4-甲氧基-N-苯基苯甲酰胺 98%甲基烯酸羟乙酯 96%

Fluorene邻甲氧基苯胺 GR,99%甲基烯酸异癸酯 98%,含150ppm MEHQ稳定剂

5-Hydroxymethylfurfural2-氨基-4-硝苯 98%甲基烯酸异冰片酯 85-90%,含150-200 ppm MEHQ稳定剂

Hexaamminecobalt(III) chloride2-氨基-4-硝苯 分析标准品二甲基烯酸新戊二酯 90%

HistoChoice® Dermatology Fixative对甲氧基苯胺 AR，99.0% 二烯酸新戊二酯 89%

HistoChoice® MB tissue Fixative4-氯-2-胺 99%甲基烯酸十八烷基酯 96%

HistoChoice® clearing agent对氯苯胺 98%三乙二二甲基烯酸酯 95%，stabilized with 60-100 ppm MEHQ

HistoChoice® mounting media2,5-二氯苯胺 98%二甲基烯酸四乙二酯 包含~0.006% 对苯二酚 稳定剂, 90%

Iodoacetyl LC Biotin2,5-二氯 99%烯酸四酯 98%,含500ppm氢醌单甲MEHQ稳定剂

Ferrous oxalate dihydrate4-(2-羟乙基)-1-哌磺酸 ≥99.0% (T) 甲基烯酸四酯 97%

Ferric tartrate2-甲基-4-胺 99%二甲基烯酸锌 95%

Lanthanum acetate hydrate4-甲基-2-胺 98%2-萘胺-1-磺酸 98%

EDTA,乙二胺四乙酸M-RIP (D8G8R) Rabbit mAbPI3 Kinase p110 beta  磷脂酰肌激酶（PI3Kβ）抗体

咪唑Eg5 (E1L3W) Rabbit mAbPI 3 Kinase p85 beta  磷脂酰肌激酶p85β抗体

L(+)-阿拉伯糖NRF2 (D1Z9C) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate)PHYH  植烷酸氧化酶抗体

去离子甲酰胺Mouse (G3A1) mAb IgG1 Isotype Control (Pacific Blue™ Conjugate)phospho-β catenin(Tyr142)  磷酸化β 连环素蛋白抗体

石蜡油Ras (G12V Mutant Specific) (D2H12) Rabbit mAbPhospho-Zyxin (Ser142/Ser143)  磷酸化斑联蛋白抗体

乙酸Nav1.5 (D9J7S) Rabbit mAbPhospho-Zap-70(Tyr493)  磷酸化zeta相关蛋白70抗体

无乙酸钠Zap-70 (D1C10E) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate)Phospho-Zap-70 (Tyr315/Tyr319)  磷酸化zeta相关蛋白70抗体

氯化c-Myc (D84C12) Rabbit mAb (Pacific Blue™ Conjugate)phospho-YWHAE(Thr232)  磷酸化14-3-3E蛋白抗体

低熔点琼脂糖；具有低凝胶温度的琼脂糖Ras (G12D Mutant Specific) (D8H7) Rabbit mAbphospho-YES1(Tyr537)  磷酸化原癌基因酪氨酸蛋白激酶Yes1抗体

无磷酸二氢SF3B1 (D7L5T) Rabbit mAbphospho-YES1(Tyr426)  磷酸化原癌基因酪氨酸蛋白激酶Yes1抗体
立克次体通用PCR检测试剂盒说明书兔血清总补体(CH50)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：1米

兔血栓素B2(TXB2)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：25克

兔血纤蛋白原(Fbg)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：100克

兔氧化低密度脂蛋白抗体(OLAb)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：500毫升

兔一氧化氮()ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：200张/盒

兔一氧化氮合成酶(S)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：保存：-20℃1克

兔胰淀素(Amylin)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：

兔乙酰胆碱(ACh)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：25克
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。