科恩酒曲菌PCR检测试剂盒规格

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
​
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
Procyanidin正 Standard for GC，>99%(GC)1-烷 99%

Grape Seed Extract乙酸正酯 AR,99.0%  CP,95.0%（）

Procyanidin B2甲醋酸酯 99% AR,98.0%（）

4-Ami-1-methyl-3-n-propyl-5-pyrazolecarboxamide乙二  99.4%三溴化磷 CP,98.0%

Grease of high temperature III正 CP,98.5% 四 97%

Piperine聚乙烯吡咯烷酮 平均分子量 8000, K16-18酸性品红 高纯级，70%

TBAF三氯乙烯 CP,98.5%考马斯紫R 50%，强度250%

TBAF trihydrate1,2,3,4-四氢萘 CP隐丹参酮 98%

2-Hexane1,2,3,4-四氢萘 AR，97%二氢丹参酮  分析标准品，≥98%

p-Tolualdehyde1,2,3,4-四氢萘 Standard for GC, ≥99.5% (GC)丹参酚酸B 分析标准品，≥98%

cis-Aconitic acid1,2,3,4-四氢萘  >98.5%(GC)丹参酮IIA磺酸钠 分析标准品，≥98%

Sodium dichloroisocyanurate1,2,3,4-四氢萘 分析标准品，≥99.5% (GC)丹参素钠 分析标准品，>98.5%

4-Chloromercuribenzoic acid四 ACS，>99.5% (GC) 丹参素钠 98%

Polyanetholesulfonic acid sodium salt四氯乙烯 CP，97%丹参酮I  分析标准品，≥98%

Ferron硫代乙酸 AR,90.0%丹参酮IIA  分析标准品，≥98%

Talc硫代乙酸 GR,98%丹参酮IIA  98%

放线菌素D(进分)Phospho-Tyrosine (P-Tyr-1000) MultiMab™ Rabbit mAb mix (Biotinylated)Plexin B2  神经丛蛋白B2抗体

放线菌素DCaspase-3 (D3R6Y) Rabbit mAbPlexin B1  神经丛蛋白B1抗体

依维菌素Caspase-3 (D3R6Y) Rabbit mAbPlexin A2  神经丛蛋白A2抗体

细胞增殖示踪荧光探针(CFDA SE)Phospho-Rad50 (Ser635) AntibodyPlexin A1  神经丛蛋白A1抗体

CAPE (咖啡酸苯乙酯)Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (197G2) Rabbit mAb (Biotinylated)PLEKHM3  血小板白细胞C激酶底物同源结构域M3抗体

磺胺-5-甲氧嘧啶(98%)Phospho-CREB (Ser133) (87G3) Rabbit mAb (PE Conjugate)PLEKHM2/SKIP  血小板白细胞C激酶底物同源结构域M2抗体

双甲脒（标准品）SimpleChIP® Chromatin IP BuffersPLEKHM1  石骨症相关蛋白PLEKHM1抗体

双甲脒UBE2C AntibodyPlectin  网蛋白抗体

柠檬酸一Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser240/244) (D68F8) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate)Pleckstrin/p47  血小板47蛋白抗体

SalubrinalPerifosinePLDL1/PLCE  磷脂酶C1样蛋白抗体
科恩酒曲菌PCR检测试剂盒规格兔Bcl-2相关X蛋白(BAX)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：1公斤

兔p53(p53)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：100克

兔p物质(SP)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：5KU

兔β淀粉样蛋白1-40(Aβ1-40)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：保存：-20℃250毫克

兔阿素(ADR)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：100克

兔白介素17(IL-17)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：5克

兔半胱氨酸蛋白酶抑制剂/胱抑素C(Cys-C)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：100克

兔吡啶交联物(PY)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：10克
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。