白鲟虹彩病毒PCR检测试剂盒说明书

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

​

实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
p-Vinylphenyl O-beta-D-glucopyrasideBOC-L-羟脯氨酸 98%咪唑 99%

Pyrocatechol moglucosideBOC-L-脯氨 98%4-甲基咪唑 98%

PyrogallolBOC-L-色氨酸 98%1,2-苯并异噻唑啉-3-酮 98%

(R)-5-Hydroxy-1,7-diphenyl-3-heptaneBOC-L-天冬酰胺 BR2, 2’-二硫代二苯甲酸 98%

ResorcilBOC-L-丝氨酸甲酯  BR三乙酯 99%

ResveratrolBOC-D-色氨酸 BR*酯 99%

RhaponiticinBOC-D-亮氨酸 98%菲 97%

Rhapontigenin 3’-O-glucosideBOC-D-苯甘氨酸 98%L-a-氨基己二酸 98%

RhapontigeninBOC-L-氨 98%过氧化钠 ACS reagent, ≥93.0%

RhododendrolBOC-D-氨 BR硫辛酸 分析标准品，≥98%

RocaglaolBOC-L-苯氨 BR黄芪皂苷 III  分析标准品，≥98%

Rubinaphthin AN-Boc-D-苯氨 98%黄芪皂苷 II  分析标准品，≥98%

RubralBOC-D-谷氨酸 BR黄芪总皂苷 分析标准品，≥98%

SakakinBOC-D-脯氨 98%黄芪皂苷I 分析标准品，≥98%

Salicyl alcoholBOC-L-环己基甘氨酸  98%盐酸黄连碱 分析标准品，≥98%

SalidrosideBOC-D-环己基甘氨酸 98%野百合碱 分析标准品

9,10-二溴蒽(>98%,BR)Centrin-2 Antibodyphospho-Kidins220 (Ser918)  磷酸化220kDa蛋白激酶D相互作用蛋白抗体

双酚芴(>98%,BR)SCF (C19H6) Rabbit mAbphospho-KCND2/Kv4.2(Thr607)  磷酸化电压门控性通道蛋白Kv4.2抗体

9-氨基吖啶单盐酸单合物(>98%,BS)HMGCS2 (D3U1A) Rabbit mAbphospho-KCND2/Kv4.2(Thr602)  磷酸化电压门控性通道蛋白Kv4.2抗体

9-咔唑乙(>95%,BR)Rab7 Antibodyphospho-KCNC1(Ser503)  磷酸化离子通道蛋白Kv3.1抗体

乙酰基乙酰苯胺(>99%,BR)RhoB Antibodyphospho-JUP(Tyr550)  磷酸化γ连环蛋白抗体

溴化乙酰胆碱(>98%,BR)RhoB Antibodyphospho-JunD(Ser255)  磷酸化活化蛋白激酶D抗体

酮肟(>98%,BR)ADAM9 Antibodyphospho-JunB(Ser79)  磷酸化活化蛋白激酶B抗体

化乙酰胆碱(>98%,BR)Phospho-Src Family (Tyr416) Antibodyphospho-JunB(Ser259)  磷酸化活化蛋白激酶B抗体

酸性蓝29(>50%，Ind Grade)Phospho-Src Family (Tyr416) AntibodyPhospho-JunB (Thr102/Thr104)  磷酸化活化蛋白激酶B抗体

酸性蓝40(>50%,BS)n-phospho-Src (Tyr416) (7G9) Mouse mAbphospho-JNK1/2/3(Thr183+Thr185)  磷酸化氨基末端激酶1/2/3抗体
白鲟虹彩病毒PCR检测试剂盒说明书小鼠破骨细胞分化因子(ODF)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：RT25克

小鼠葡萄糖依赖性胰岛素释放多肽(GIP)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：25PK

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