白蛉热西西里病毒PCR检测试剂盒说明书

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注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
Gaderic acid AM1羧甲基纤维素 M.W. 250000 (DS=1.2) ,1500-3100mPa.s隐色结晶紫 分析标准品

Gaderic acid B羧甲基纤维素 M.W. 250000 (DS=0.9) ,1500-3100mPa.s隐色结晶紫 98%

Gaderic acid C1羧甲基纤维素 M.W. 250000 (DS=0.7) ,1500-3100mPa.sβ-萘酚 荧光指示剂, ≥99.0% (GC

Gaderic acid C2羧甲基纤维素 M.W. 90000 (DS=0.7) ,50-100mPa.s*基氯硅烷 >98.0%(GC)

Gaderic acid C6羧甲基纤维素钠 粘度: 300-800mpa.s,USP级*基氯硅烷 Wacker quality, ≥99.0% (GC)

Gaderic acid D羧甲基纤维素钠 粘度: 800-1200mpa.s ,USP级二甲基氯硅烷 96%

Gaderic acid DM羧甲基纤维素钠 粘度：≥1200mpa.s,USP级二甲基二氯硅烷 CP,扫尾剂

Gaderic acid F羧甲基纤维素 粘度: 600-1000mpa.s,USP级二甲基二氯硅烷 色谱固定液

Gaderic acid H乙基纤维素 3-7mPa.s, 5%甲苯/异80:20二甲基二氯硅烷  >98.5%(GC)

Gaderic acid I乙基纤维素 6-9mPa.s, 5%甲苯/异80:20二甲基二氯硅烷 CP,96.0%

Gaderic acid K乙基纤维素 9-11mPa.s, 5%甲苯/异80:20甲基二氯硅烷 99%

Gaderic acid LM2乙基纤维素 18-22mPa.s, 5%甲苯/异80:20甲基三氯硅烷 99%

Gaderic acid M乙基纤维素 45-55mPa.s, 5%甲苯/异80:20三氯硅烷 99%

Gaderic acid N乙基纤维素 90-110mPa.s,5%甲苯/异80:20雄烯二酮 分析标准品，≥99%

Gaderic acid S乙基纤维素 180-220mPa.s, 5%甲苯/异80:20二氯乙酰氯 98%

Gaderic acid SZ乙基纤维素 270-330mPa.s,5%甲苯/异80:20三氯乙酰氯 98%

次硝酸铋(>98%,BR)POMP (D2X9S) Rabbit mAbPhospho-PBK/TOPK(Thr9)  磷酸化PDZ连接激酶/T-LAK细胞源蛋白激酶抗体

碳酸酐酶>3000U/mgα-Actinin 4 (D7U5A) Rabbit mAbPhospho-Paxillin(Tyr88)  磷酸化桩蛋白Paxillin抗体

羧肽酶 B >170 U/mgOX40 (D1S6L) Rabbit mAb (PE Conjugate)Phospho-Paxillin(Tyr31)  磷酸化桩蛋白Paxillin抗体

碳酸钴(II)(>98~102%,BR)Propionyl-Lysine [Prop-K] (D3A9R) Rabbit mAbPhospho-Paxillin(Ser83)  磷酸化桩蛋白Paxillin抗体

硝酸铜三(>99%,BR)VIMP (D1D1M) Rabbit mAbPhospho-Paxillin(Ser178)  磷酸化桩蛋白Paxillin抗体

2'-脱氧脱氧胸苷-5'二磷酸三钠盐Annexin A2 (D11G2) Rabbit mAb (PE Conjugate)Phospho-Paxillin (Tyr118)  磷酸化桩蛋白Paxillin抗体

半乳糖氧化酶(酶活：> 30 U/mg，BC)CTLA-4 (D4E9I) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)phospho-PARK2(Ser378)  磷酸化帕金蛋白抗体

3-吲哚酸(>99%,植物激素级)HDAC4 (D8T3Q) Rabbit mAbphospho-PARK2(Ser101)  磷酸化帕金蛋白抗体

草酸亚铁二(>99%,BR)PD-L1 (Extracellular Domain Specific) (E1J2J™) Rabbit mAbPhospho-PAR4 (Thr163)  磷酸化蛋白酶活化受体4抗体

硝酸镧六(>99%,BR)FAM3C (D1S2D) XP® Rabbit mAbphospho-PAK6(Ser165)  磷酸化P21蛋白激活的蛋白激酶6
白蛉热西西里病毒PCR检测试剂盒说明书小鼠丙酸脱酶E1(PDHE1)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：1公斤

小鼠补体1抑制物抗体(C1INH)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：RT100克

小鼠补体蛋白3(C3)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：RT，避光1克

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小鼠补体片断3a(C3a)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：1公斤

小鼠补体片断5a(C5a)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：1公斤

小鼠层连蛋白/板层素(LN)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：100克

小鼠超敏C反应蛋白(hs-CRP)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：500克