劳斯伴随病毒PCR检测试剂盒说明书

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
​
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
Mesityl oxide2,6-二氟苯酸 98%4-正基乙炔 98%

Pyrimidine2,6-二氟吡啶-3-酸 95%4-正戊基苯酸 97%

3-Ami-1,2-propanediol2,5-二酸  97%1-溴-4-戊苯 97%

Salicyl alcohol2,4-二氟苯酸  98%4-甲基联苯 98%

Deuterium oxide2,5-二氟苯酸 97%4-正戊基联苯 99%

Luteolin2,3-二氯吡啶-4-酸 95%4-正基环己酮 99%

DEAD4-(二甲基氨基)苯酸 95%4-基-4'-戊基联苯 98%

Dimethylphosphinic acid2,6-二氯吡啶-3-酸 95% 4-基-4'-戊氧基联苯 98%

2,4-Pentanedione2,5-二氯吡啶-3-酸 95%4-正基苯酸 97%

Potassium Sulfide2,5-二氯吡啶-4-酸 95%4-正氧基苯酸 97%

Menthone2,6-二酸 98%4-三氟甲基硫代苯甲酰胺 98%

Ursolic acid2,4-二甲氧基嘧啶-5-酸 90%4-三氟甲氧基苯酸  98%

Cinchonidine2,4-二苄氧基嘧啶-5-酸 95% 3,4,5-三氟苯酸 97%

ACCA3-二甲氨基苯酸盐酸盐 98% 对酸 97%

TTA3-乙氧羰基苯酸 97%4-(三氟甲基)苯酸 98%

12-Amilauric acid2-乙氧基-1-萘酸 98%4-(反-4-基环己基)苯 98%

3-氨基-1,2,4-三唑FoxO3a (D19A7) Rabbit mAb (PE Conjugate)phospho-Tau protein(Thr181)  磷酸化微管相关蛋白抗体

磷酸钠十二Phospho-p38 MAPK (Thr180/Tyr182) (3D7) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)phospho-Tau protein(Ser721)  磷酸化微管相关蛋白抗体

无磷酸氢二钠(分子生物学级)NRF2 (D9J1B) Rat mAb (IF Specific)phospho-Tau protein(Ser422)  磷酸化微管相关蛋白抗体

菲啰,菲洛GMPS Antibodyphospho-Tau protein(Ser416)  磷酸化微管相关蛋白抗体

乙酸钠三(分子生物学级)Phospho-Stat5 (Tyr694) (D47E7) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate)phospho-Tau protein(Ser404)  磷酸化微管相关蛋白抗体

脱叶灵,噻苯隆Endoglin (3A9) Mouse mAbphospho-Tau protein(Ser396)  磷酸化微管相关蛋白抗体

(AR)XPA (D9U5U) Rabbit mAbphospho-Tau protein(Ser356)  磷酸化微管相关蛋白抗体

乙脱氢酶ARFGAP1 (D4C2M) Rabbit mAbphospho-Tau protein(Ser262)  磷酸化微管相关蛋白抗体

吐温80(化学纯)c-Fos (9F6) Rabbit mAb (PE Conjugate)phospho-Tau protein(Ser235)  磷酸化微管相关蛋白抗体

吐温80(药用级)Phospho-Myosin IIa (Ser1943) (D7Z7T) Rabbit mAbphospho-Tau protein(Ser214)  磷酸化微管相关蛋白抗体
劳斯伴随病毒PCR检测试剂盒说明书兔子基质金属蛋白酶4(MMP-4)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：100克

兔子基质金属蛋白酶5(MMP-5)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：50毫克

兔子基质金属蛋白酶9(MMP-9)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：保存：-20℃100毫克

兔子基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：RT1克

兔子甲状腺素(T4)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：RT10克

兔子碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：RT10克

兔子胶原酶I(CollagenaseI)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：RT1克

兔子胶原酶II(CollagenaseII)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：RT1000支/盒
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。