兔粘液瘤病毒PCR检测试剂盒说明书

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

​

实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
 Silicic acid乙基三苯基化膦 95%DL-α-酚 分析标准品

Silicotungstic acid hydrate甲基三苯基溴化鏻 98%*基氢醌 98%

Tungstic acid四甲基化铵 98%D-α-酚醋酸酯 96%

2-Butynedioic acid四甲基氢氧化铵 AR,25%溶液L-赖氨酸甲酯盐酸盐 98%

α-Bromoisobutyric acid四丁基氯化铵 离子色谱级, ≥99.0%苯甲 AR，99%

Chrysophanic acid四丁基氯化铵 97%草酸二甲酯 CP，98%

Cinnamic acid四乙基氢氧化铵 AR,25%溶液马来酸二乙酯 96%

Citrazinic acid四乙基氢氧化铵 AR,25%甲溶液1,4-二甲氧基苯 99%

Tricyanic acid三盐酸盐 98%1,4-二甲氧基苯 ≥99%,FCC

1,1-Cyclobutanedicarboxylic acid四丁基氢氧化铵溶液 ～25% in H2O (～0.8 M)间苯二甲 98%

trans-Ferulic acid四丁基氢氧化铵溶液 10% in H2O马来酸二甲酯 98%

Ferulic acid四丁基氢氧化铵溶液 ～25% in methal (～0.8 M)乙酯 AR,99%

Heptadecaic acid四丁基硫酸氢铵 98%苯乙 CP

Heptaic acid四丁基硫酸氢铵 离子对色谱苯乙 GR,99%

Trans-2-Hexeic acid四丁基溴化磷 98%甲氧基乙酸甲酯 99%

Itaconic acid三乙胺盐酸盐 for HPLC, ≥99.0%1-萘甲  98%

纽莫康定B0(肺囊康定) Syk (D3Z1E) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)PTP1B  蛋白酪氨酸磷酸酶-1B

福莫特罗 Syk (D3Z1E) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)PTP/PTPase/CD148  蛋白酪氨酸磷酸酶CD148抗体

溴甲后马托品p27 Kip1 (D69C12) XP® Rabbit mAb (Biotinylated)PTOV1  前列腺肿瘤高表达蛋白1抗体

乙酸阿比特龙酯CD13/APN (E1Y7U) Rabbit mAbPTOP  肾上腺皮质发育异常同源蛋白抗体

溴莫尼定 Syk (D3Z1E) XP® Rabbit mAb (Pacific Blue™ Conjugate)PTN/Pleiotrophin  多效生长因子抗体

磺草灵PSMB8/LMP7 (1A5) Mouse mAbPTK9/TWF1  蛋白酪氨酸激酶9抗体

磺草灵(标准品)β-Catenin (D10A8) XP® Rabbit mAb (Biotinylated)PTHrP/PTHLH  甲状旁腺激素相关蛋白抗体

苯磺酸贝托司汀MOB1 (E1N9D) Rabbit mAbPTGEs  前列腺素E合成酶抗体

叶绿素铜钠盐GABARAP (E1J4E) Rabbit mAbPTGER1  前列腺素EP1受体抗体

新绿原酸(标准品)Phospho-Progesterone Receptor (Ser294) AntibodyPTEN/MMAC1(NT)  一种肿瘤抑制基因抗体（N端）
兔粘液瘤病毒PCR检测试剂盒说明书人胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：1公斤

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