痤疮丙酸杆菌PCR检测试剂盒说明书

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

​

实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
Tridecane橄榄油 CP4-氟苯胺 99%

Tetradecane橄榄油 药用级，Ph Eur1-氟-4- 98%

Hexadecane亚磷酸三乙酯 98%4-氟苯酚 99%

Heptadecane二茂铁 98%4－羟基－环己烷甲酸乙酯 98%

nadecane二茂铁 99%胆酸甲酯 97%

Heptacosane聚（甲基烯酸甲酯） SU牛磺脱氧胆酸 98%

Octacosane聚苯乙烯(PS) 通用型II,高强度甘胆酸钠 98%

Hexatriacontane聚苯乙烯(PS) 通用型III,高强度、押出用、食品用甘氨脱氧胆酸钠 97%

DEP聚苯乙烯(PS) 耐冲击型鹅去氧胆酸钠 97%

Naphthol AS-MX phosphate聚苯乙烯(PS) 高光泽度级胆酸钠 98%

Naphthol AS-TR phosphate聚苯乙烯(PS) 挤出級1-乙基-2-吡咯烷酮 99%

Naphthol AS-BI phosphate聚苯乙烯(PS) 食品级γ -丁内酯  AR, ≥99%

GMS硫代乙酸铵 试剂级,70%溶液γ -丁内酯  >99.9% (GC)

Dimethyl succinate硫代乙酸 CP,85.0%N-甲基吡咯烷酮 AR,99.0%

MAA邻苯二甲酸二异辛酯 CP，98%N-甲基吡咯烷酮 CP,98.0%

Methyl 4-hydroxybenzoate邻苯二甲酸二辛酯 GRN-甲基吡咯烷酮  for HPLC, ≥99.5%

盐酸甲苯噻/泊酚杂质JPhospho-Stat4 (Tyr693) (D2E4) Rabbit mAb (PE Conjugate)Rabbit anti-Goat IgM whole serum  兔抗羊IgM抗血清

盐酸甲苯噻/泊酚杂质J(标准品)TEAD3 AntibodyRabbit Anti-Goat IgM  兔抗羊IgM

N-乙酰神经氨酸/唾液酸NIPSNAP1 (D1Y6S) Rabbit mAbRabbit Anti-Goat IgG/RBITC  罗丹明标记的兔抗羊IgG

红霉素Phospho-α-E-Catenin (Ser655/Thr658) AntibodyRabbit Anti-Goat IgG/PE-Cy7  PE-Cy7标记的兔抗羊IgG

红霉素(标准品)T-bet/TBX21 (D6N8B) XP® Rabbit mAbRabbit Anti-Goat IgG/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5标记的兔抗羊IgG

乌甲素（标准品）T-bet/TBX21 (D6N8B) XP® Rabbit mAbRabbit Anti-Goat IgG/PE-CY5  PE-CY5标记的兔抗羊IgG

高乌甲素DCP1B (D2P9W) Rabbit mAbRabbit Anti-Goat IgG/PE-Cy3  PE-Cy3标记的兔抗羊IgG

盐酸多巴酚丁胺CD46 (D6N7H) Rabbit mAbRabbit Anti-Goat IgG/PE  PE标记的兔抗羊IgG

羟基β环糊精;2-羟基-β-环糊精Kinectin 1 (D5F7J) Rabbit mAbRabbit Anti-Goat IgG/HRP  辣根过氧化物酶标记的兔抗羊IgG

羧甲基壳聚糖LIMD1 AntibodyRabbit Anti-Goat IgG/Gold  胶体金标记的兔抗羊IgG
痤疮丙酸杆菌PCR检测试剂盒说明书人细胞毒素(CTX)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：RT5克

人细胞毒素相关蛋白A(CagA)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：RT25克

人细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4/CD152)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：25克

人细胞间粘附分子1(ICAM-1/CD54)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：12毫升

人细胞间粘附分子2(ICAM-2/CD102)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：RT25克

人细胞间粘附分子3(ICAM-3/CD50)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：500毫克

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人细胞角蛋白17(CK17)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：保存：-20℃100U