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产品名称 | 牙龈卟啉单胞菌PCR检测试剂盒厂家 |
英文名称 | Porphyromonas gingivalis PCR |
货号 | LZP7178 |
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。
DPG甲氧甲酰基亚甲基三苯基膦 98%氢二钠 AR()
Guanidine carbonate甲氧甲酰基三苯基溴化膦 98%三乙酯 99%
Isophorone甲基三辛基氯化铵 97%氟化,无 电子级,粉末
Rotene甲基三苯基溴化鏻 98%1,1,1,2-四氟乙烷 99.95%
Corticosterone(甲氧基)三苯基氯化磷 98%三 AR,99.0%
MBTH Hydrochloride基三苯基溴化膦 99%甲基烯酸三氟乙酯 包含 100 ppm MEHQ 稳定剂,98%
PVPP四甲基化铵 98%2,2,2-三氟乙 99.5%
1,3-Dihydroxyacetone dimmer四丁基氟化铵,三 90%大黄素 ≥90% (HPLC)
4-Amiantipyrine苯基*基溴化铵 98%石杉碱甲 分析标准品
Cyclohexane四基氯化铵 97%石杉碱甲 99%
Acetophene甲基三乙基氯化铵 98%和厚朴酚 分析标准品
3'-Amiacetophene甲基三丁基氯化铵 75 wt. % in H2O杨梅素 97%
Benzanthrone四苯基溴化膦 98%杨梅素 分析标准品,≥98%
Benzylacetone四乙基氢氧化铵 AR,25%溶液厚朴酚 ≥98% (HPLC)
Bis-pyrazolone四基化铵 98%杨梅苷 98%
Cyclooctane四基氢氧化铵 1.0 M in H2O葛根素 分析标准品,≥98%
苏丹Ⅲ/苏丹红III/溶剂红23Phospho-FoxO3a (Ser253) (D18H8) Rabbit mAbRabbit Anti-Guinea pig IgM/APC APC标记的兔抗豚鼠IgM
苏丹Ⅳ/苏丹红4/溶剂红24MT1-MMP (D1E4) Rabbit mAbRabbit Anti-Guinea pig IgM/AP 碱性磷酸酶(AP)标记的兔抗豚鼠IgM
油红O/溶剂红27/苏丹红5BMMP-2 (D8N9Y) Rabbit mAbRabbit Anti-Guinea pig IgM/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647标记的兔抗豚鼠IgM
苏丹红G/溶剂红1/油红113TRF2 (D1Y5D) Rabbit mAbRabbit Anti-Guinea pig IgM/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555标记的兔抗豚鼠IgM
苏丹/溶剂黑3SignalSilence® IRF-7 siRNA IRabbit Anti-Guinea pig IgM/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488标记的兔抗豚鼠IgM
苏丹红BLAMTOR4/C7orf59 (D4P6O) Rabbit mAbRabbit Anti-Guinea pig IgM/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350标记的兔抗豚鼠IgM
苏丹红7B/溶剂红19/脂肪红7BSOD2 (D3X8F) XP® Rabbit mAbRabbit anti-Guinea pig IgM whole serum 兔抗豚鼠IgM抗血清
苏丹蓝II/溶剂蓝35SOD2 (D3X8F) XP® Rabbit mAbRabbit Anti-Guinea pig IgM 兔抗豚鼠IgM
吖啶橙/碱性橙14Neurogenin 2 (D2R3D) Rabbit mAbRabbit Anti-Guinea pig IgG/RBITC 罗丹明标记的兔抗豚鼠IgG
甲基红Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (197G2) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjugate)Rabbit Anti-Guinea pig IgG/PE-Cy7 PE-Cy7标记的兔抗豚鼠IgG
牙龈卟啉单胞菌PCR检测试剂盒厂家人脱氧胶原吡啶交联(DPD)ELISA试剂盒 *shēng huà shì jì 容量:RT10克
人脱氧尿三磷酸(DUTP)ELISA试剂盒 *shēng huà shì jì 容量:RT1米
人唾液酸(SA)ELISA试剂盒 *shēng huà shì jì 容量:100毫升
人晚期糖基化终末产物(AGEs)ELISA试剂盒 *shēng huà shì jì 容量:RT100克
人晚期糖基化终末产物受体(RAGE/AGER)ELISA试剂盒 *shēng huà shì jì 容量:10克
人晚期氧化蛋白产物(AOPP)ELISA试剂盒 *shēng huà shì jì 容量:25毫升
人网膜素(omentin)ELISA试剂盒 *shēng huà shì jì 容量:2~8℃25毫升
人微管相关蛋白2(MAP-2)ELISA试剂盒 *shēng huà shì jì 容量:10S/盒
检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
(1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。