肺孢子虫通用PCR检测试剂盒厂家

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

​

实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
Cephalin亚磷酸三苯酯 98%二乙烯苯 55%

TMEDA四氢糠 AR,98.0%乙基苯 >99.5%(GC)

TPT四氢糠 CP乙酸甲酯  ≥99%(GC)

p-Phenylenediamine四氢糠 99%甘氨酸 AR,99.5-100.5%

1，4-Phenylenediamine dihydrochloride四甲基溴化铵 AR三氯蔗糖  98%

Chloramine T trihydrate甲苯二异酸酯 98%（）烯酸叔丁酯 99%,含10-20 ppm MEHQ 作为稳定剂

WSC甲苯二异酸酯 Standard for GC（）烯酸叔丁酯 standard for GC, ≥99.5% (GC)

EDAC•HC1苯硫酚 99%（）1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯 99%

Phelphthalein mophosphate bis(cyclohexylammonium) salt四甲基溴化铵 离子对色谱级，≥99.0% (AT)N-(3-二甲氨基基)甲基烯酰胺 99%

 N-(1-Naphthyl)ethylenediamine四甲基溴化铵 ACS, ≥98.0%1,5-二氮杂双环[4.3.0]-5-壬烯 98%

PHⅢ乙烷 99%,含铜屑稳定剂烯酸异丁酯 99%

Benzamide三 AR,99.5%鸡蛋白蛋白 98%

PEI1-烷 99%1,1-环己基二乙酸酐 98%

4-Methylaniline hydrochloride壳聚糖  脱乙酰度≥95%, ,粘度100-200 mpa.s乙酰酮钡 Ba ≥30.0 %

Aniline hydrochloride羧化壳聚糖 BR,溶性硫柳汞钠 AR,98%

Benzidine壳聚糖 低粘度：<200 mPa.s钠 AR

甘油单油酸酯/单油酸甘油酯Prostate Specific Membrane Antigen (D7I8E) XP® Rabbit mAbRabbit Anti-MK IgM/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647标记的兔抗猴IgM

ADP.Na2; 5'-二磷酸腺苷二钠/腺苷-5'-二磷酸二钠盐SSU72 (D3I2D) Rabbit mAbRabbit Anti-MK IgM/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555标记的兔抗猴IgM

ADP; 5'-二磷酸腺苷/腺苷-5'-二磷酸Phospho-CaMKK2 (Ser511) AntibodyRabbit Anti-MK IgM/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488标记的兔抗猴IgM

沙格列汀/沙克列汀TunicamycinRabbit Anti-MK IgM/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350标记的兔抗猴IgM

更昔洛韦BCAT1 AntibodyRabbit Anti-Mink IgG/RBITC  罗丹明标记的兔抗貂IgG

更昔洛韦(标准品)POLR3A (D5Y2D) Rabbit mAbRabbit Anti-Mink IgG/PE-Cy7  PE-Cy7标记的兔抗貂IgG

5,6-二甲基-1-茚酮Vimentin (D21H3) XP® Rabbit mAb (HRP Conjugate)Rabbit Anti-Mink IgG/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5标记的兔抗貂IgG

芍药苷（标准品）Caspase-7 (D2Q3L) Rabbit mAbRabbit Anti-Mink IgG/PE-CY5  PE-CY5标记的兔抗貂IgG

芍药苷(40%)Caspase-7 (D2Q3L) Rabbit mAbRabbit Anti-Mink IgG/PE-Cy3  PE-Cy3标记的兔抗貂IgG

芍药苷(50%)PathScan® Total FGF Receptor 1 Sandwich ELISA KitRabbit Anti-Mink IgG/PE  PE标记的兔抗貂IgG
肺孢子虫通用PCR检测试剂盒厂家人状瘤病毒抗体IgM(HPV-IgM)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：RT5克

人癌标志物-CA153ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：保存：-20℃10毫克

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