桔青霉PCR检测试剂盒说明书

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
Eosin B肉桂酸 standard for GC,>99.5% (GC) 细胞色素C 95%

Eosin Y sodium salt water soluble肉桂酸 AR，99%DNA酶 ≥300 Kunitz units/mg protein

Eosin Y free acid alcohol soluble肉桂酸 分析标准品DNA酶 ≥2,000 Kunitz units/mg protein

Oil red O肉桂 98%弹性蛋白酶 30 units/mg

Ponceau S肉桂 分析标准品，>99.5%（GC)透明质酸酶 ≥ 300 IU/mg

Methylene Blue trihydratee肉桂酸 ≥99.0%, FG辣根过氧化物酶 RZ：>3.0，活性：>250 IU/mg

TBPB肉桂酸 天然, ≥99%, FCC辣根过氧化物酶 RZ：>2.5，活性：>200 IU/mg

Evans blue香茅  85%,FCC辣根过氧化物酶 RZ：>2.0，活性：>160 IU/mg

INT香茅  96%RZ：1.5 RZ：>1.5，活性：>100 IU/mg

NBT肉桂 98%辣根过氧化物酶 RZ：>3.0，活性：>300 IU/mg

Indigo肉桂 分析标准品，>99%（GC)核糖核酸酶 ≥ 50 Kunitz units/mg

Indigo carmine正癸 Standard for GC,≥99.5% (GC)胰蛋白酶（牛胰脏） potency ≥2500 units/mg

Thymol blue正癸 98%邻甲酚 99%

Thymol Blue sodium salt琥珀酸二乙酯 98%间甲酚 99.7%，无色

BPB琥珀酸二乙酯 99%间甲酚  Standard for GC,≥99.7%(GC)

Bromophel blue sodium salt琥珀酸二乙酯 standard for GC, ≥99.6% (GC)间甲酚 CP

红霉酮(特利霉素)Protor-2 (D19A5) Rabbit mAbReprimo  细胞质内的糖基化蛋白抗体

替米沙坦RCAS1 (D2B6N) XP® Rabbit mAbRepetin  中间丝相关蛋白抗体

替米沙坦（标准品）RCAS1 (D2B6N) XP® Rabbit mAbRENT1/hUPF1  ATP依赖解旋酶RENT1抗体

rotein A (HRP Conjugate)Renin  肾素/血管紧张素形成酶Ren1抗体

（标准品）TEAD1 (D9X2L) Rabbit mAbRENBP  肾素结合蛋白抗体

噻托溴铵一合物ATP2A1/SERCA1 (D54G12) Rabbit mAbRenalase  肾胺酶抗体

盐酸胺酮CUEDC2 AntibodyREM/GTP binding protein REM1  GTP结合蛋白REM1抗体

盐酸胺酮（标准品）FXR1 (D10A2) XP® Rabbit mAbRELN/Reelin  络丝蛋白抗体

阿莫曲普坦苹果酸盐FXR1 (D10A2) XP® Rabbit mAbRELMa/RELM alpha  抵抗素样分子α抗体

阿糖腺苷PKR (D7F7) Rabbit mAbRELM beta/CCGR  结肠癌相关基因蛋白抗体
桔青霉PCR检测试剂盒说明书人可溶性凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1(sLOX-1)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：1公斤

人可溶性瘦素受体(sLR)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃1克

人可溶性髓系细胞触发受体-1(sTREM-1)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量： 保存-20℃1毫克

人可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：1克

人可溶性细胞因子受体(sCKR)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：500毫升

人可溶性腺苷酸环化酶(sAC)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：500毫升

人可溶性血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2/sFLK-1)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：保存：-20℃25毫克

人可溶性血管内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：10毫升
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。