诺氏疟原虫PCR检测试剂盒说明书

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
​
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
Benzyltrimethylammonium bromide2-硝基噻吩 98%2,4,6-三氟苯酸 96%

3-(2-Amiethylami)propyldimethoxymethylsilane四溴噻吩 99%2-(三氟甲基)苯酸  97%

Polyquaternium-10噻吩-2,3-二甲 98%4-三氟甲氧基苯酸  98%

THAM盐酸胍 分子生物学级，99.5%3-(三氟甲氧基)苯酸  98%

BIS-TRIS propane盐酸胍 99.5%2-(三氟甲氧基)苯酸 97%

TRIS-HC1盐酸胍 蛋白变性，99.5%2,4,5-三溴咪唑 98%

TRIS acetate salt盐酸胍 AR,99.0%3,4,5-三氟苯酸 97%

Tris carbonate盐酸胍 CP,98.0%2,3,4-*氧基苯酸 98%

CAPS硫酸胍 99%2-酸 98%

CAPSO聚烯酰胺 非离子型，分子量：200万-1400万3-酸 97%

CAPSO sodium salt2,4-二氯苯氧乙酸 97%3,4,5-*氧基苯酸 97%

CAPS Sodium salt2,4-二氯苯氧乙酸 分析标准品间三氟酸 97%

PIPES2,4-二氯苯氧乙酸标准溶液 1000mg/L，基体：甲3-乙烯基苯酸 96%

PIPES sesquisodium salt2,5-二氯苯氧乙酸标准溶液100μg/ml，溶剂：甲4-乙烯基苯酸 96%

POPSO2,4-二氯苯氧乙酸 用于植物细胞培养, ≥98%（GC)二甲苯 CP，98%(二甲苯异构体+乙基苯）

POPSO-2Na过氧化脲素 97%二苯胺 AR,99.0%

扎西他滨,2',3'-二脱氧胞苷HER3/ErbB3 (D22C5) XP® Rabbit mAbRabbit Anti-mouse IgG-Fc/Bio  生物素标记的兔抗小鼠IgG-Fc

玉米素核苷 PAX5 (D7H5X) XP® Rabbit mAbRabbit Anti-mouse IgG-Fc/APC  APC标记的兔抗小鼠IgG-Fc

齐留通PAX5 (D7H5X) XP® Rabbit mAbRabbit Anti-mouse IgG-Fc/AP  碱性磷酸酶（AP）标记的兔抗小鼠IgG-Fc

齐留通（标准品）MERIT40 (D7Y5K) Rabbit mAbRabbit Anti-mouse IgG-Fc/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647标记的兔抗小鼠IgG-Fc

依诺沙星(溶性）Phospho-TPOR (Tyr626) (D3H7B) Rabbit mAbRabbit Anti-mouse IgG-Fc/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555标记的兔抗小鼠IgG-Fc

氧氟沙星uPAR (D7X2N) Rabbit mAbRabbit Anti-mouse IgG-Fc/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488标记的兔抗小鼠IgG-Fc

氧氟沙星（标准品）Phospho-c-Jun (Ser73) (D47G9) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)Rabbit Anti-mouse IgG-Fc/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350标记的兔抗小鼠IgG-Fc

阿巴卡韦  Phospho-CaMKII (Thr286) (D21E4) Rabbit mAbRabbit anti-mouse IgG-Fc fragment whole serum  兔抗小鼠IgG-Fc段抗血清

阿巴卡韦 (标准品)Phospho-CaMKII (Thr286) (D21E4) Rabbit mAbRabbit Anti-mouse IgG-Fc  兔抗小鼠IgG-Fc

烟酰胺/尼克酰胺/维生素B3Toll-like Receptor 6 (D1Z8B) Rabbit mAbRabbit Anti-mouse IgG/RBITC  罗丹明标记的兔抗小鼠IgG
诺氏疟原虫PCR检测试剂盒说明书人葡萄糖氧化酶(GOD)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：1克

人葡萄糖依赖性胰岛素释放多肽(GIP)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：500毫克

人葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：1克

人葡萄糖转运蛋白3(GLUT3)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：保存：-20℃150毫克

人普通急性淋巴细胞白血病抗原(CALLA)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：RT5克

人前白蛋白(PA)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：5克

人前病毒整合位点1(Pim1)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：25克

人前列环素(PGI)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：1公斤
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。