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杂色青霉PCR检测试剂盒说明书

杂色青霉PCR检测试剂盒说明书

产品简介:杂色青霉PCR检测试剂盒说明书
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OPG检测试剂盒经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后,PBS或TBS洗涤

产品型号:50T

浏览次数:40

更新时间:2021-03-13

产品厂地:上海市

详情介绍
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注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。

 产品名称

 杂色青霉PCR检测试剂盒说明书

 英文名称

 Penicillium versicolorPCR

 货号

 LZP7131

组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。

实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。
Malachite green oxalate乙酸甲酯 GCS,≥99.9% (GC) 7-甲基吲哚 98%

Malachite green乙酸甲酯 AR,98%4-甲基吲哚 98%

Fast Blue B salt乙酸甲酯 CP,97.5%  N-甲基间甲苯胺 97%

3,3'-Dimethoxybenzidine乙酸甲酯 分析标准品,99.9%(GC)1-甲基吡唑 98%

o-Dianisidine dihydrochloride乙酸甲酯  ≥99%(GC)(S)-(+)-扁桃酸甲酯 98%

Amaranth乙酸甲酯 for HPLC, ≥99.5% (GC)(R)-(-)-扁桃酸甲酯 98%

Murexide乙酸甲酯 无级, 99.5%2-甲基烯 ≥99.5%

o-Cresolphthalein肉桂酸甲酯 99%5-甲酰基杨酸甲酯 98%

o-Cresolphthalein complexon肉桂酸甲酯 ≥99%, FCC, Kosher, FG2- 98%

Xylel Orange甲酯 99%5-硝基吲哚 98%

 Xylel Orange tetrasodium salt甲酯 ≥99%, FCCDL-α-氨基 98%

Calcein癸酸甲酯 Standard for GC ,≥99.5% (GC) R-(-)-1,2- 99%

Calcein disodium salt癸酸甲酯 98%(S)-(+)-1,2- 98%

Eriochrome black T癸酸甲酯 分析标准品,用于环境分析,≥99.5% (GC)2-苯基异丁酸 98%

Eriochrome blue black R草莓酸 98%4-吡啶乙酸盐酸盐 98%

m-Methyl red肉豆蔻酸甲酯 98%4-(1-吡咯烷)苯甲 97%

非那西丁FIP200 (D10D11) Rabbit mAbRAP1GDS1  G蛋白GTP-GDP解离刺激因子1抗体

非那西丁(标准品)Phospho-DARPP-32 (Thr34) (D27A4) Rabbit mAbRAP1GAP  RAP1GAP酶激活蛋白抗体

盐酸芬戈莫德CD82 (D7G6H) Rabbit mAbRAP1A  抗Rap1A抗体

盐酸芬戈莫德(标准品)S5a/PSMD4 (D20B2) Rabbit mAbRANK/CD265  核转录因子NF-κB受体抗体(核因子kB受体活化因子)

氟芬那酸,氟灭酸MTMR3 AntibodyRanGAP1  RAN GTPase酶激活蛋白1抗体

氟芬那酸,氟灭酸(标准品)PSMA3 (D4Y9O) Rabbit mAbRanBP7/Importin 7  RAN结合蛋白7抗体

氟马西尼/氟马泽尼CK1ε AntibodyRanBP3  RAN结合蛋白3抗体

氟马西尼/氟马泽尼(标准品)Puma (D30C10) Rabbit mAbRanBP2  RAN结合蛋白2/核孔蛋白抗体

盐酸氟西汀Puma (D30C10) Rabbit mAbRanBP1  RAN结合蛋白1抗体

盐酸氟西汀(标准品)LIS1 AntibodyRan/ARA24  雄激素受体相关蛋白24抗体
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检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。

 

 



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