海水派琴虫PCR检测试剂盒说明书

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
​
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
Anthrone软脂酸 分析标准品，>99%(GC)聚乙烯 6-98 Mw ~47,000

Thiomichler's ketone软脂酸 97%聚乙烯 8-88 Mw ~67,000

Michler's ketone软脂酸 99%四氧化三钴 CP,Co 72.0～73.5%

Phenylfluorone正戊 GR,99%四氧化三钴 99.9% metals basis

PMBP2-苯乙 Standard for GC,>99.5%(GC)钴酸锂 99.8% metals basis

PMP2-苯乙 CP,98%乙酰氯 AR,98.5%

Phenidone2-苯乙 AR,99%乙酰溴 97%

α-Naphtholbenzein2-苯乙 ≥99%, FCC, FG三乙基苄基氯化铵 98%

Azocarmine B正 GCS,≥99.8% (GC) 异丁酰氯 98%

Azocarmine G正 AR,99.0%  酰溴  95%

Thionin正 CP,98.5% 酰氯 98%

 Tartrazine正  for HPLC, ≥99.9%四丁基溴化铵 CP,98.0%

Allura Red AC正  ACS, ≥99.5%四乙基溴化铵 98%

Sunset Yellow FCF正 分析标准品蒽醌 CP

Lissamine rhodamine B正 农残级2-甲基萘 97%

Phesafranine酸 AR,≥99.5% (GC) N,N,N',N'-四甲基-1,3-二胺 97%

富马酸酮替芬IL-1β (D3H1Z) Rabbit mAb (Mouse Specific)Rabbit Anti-rat IgM/PE-CY5  PE-CY5标记的兔抗大鼠IgM

富马酸酮替芬(标准品)Keratin 17 (D12E5) XP® Rabbit mAbRabbit Anti-rat IgM/PE-Cy3  PE-Cy3标记的兔抗大鼠IgM

酮咯酸Keratin 17 (D12E5) XP® Rabbit mAbRabbit Anti-rat IgM/PE  PE标记的兔抗大鼠IgM

来氟米特PTEN Blocking PeptideRabbit Anti-rat IgM/HRP  辣根过氧化物酶标记的兔抗大鼠IgM

来氟米特（标准品）FGF Receptor 1 (D8E4) XP® Rabbit mAb (Biotinylated)Rabbit Anti-rat IgM/Gold  胶体金标记的兔抗大鼠IgM

左氧氟沙星LC3B (D11) XP® Rabbit mAb (Biotinylated)Rabbit Anti-rat IgM/FITC  FITC标记的兔抗大鼠IgM

左氧氟沙星（标准品）SignalSilence® BRCA1 siRNA IRabbit Anti-rat IgM/Cy7  Cy7标记的兔抗大鼠IgM

氯诺昔康Voristat (SAHA)Rabbit Anti-rat IgM/Cy5.5  Cy5.5标记的兔抗大鼠IgM

氯诺昔康(标准品)Mo-Methyl-Histone H3 (Lys79) (D5X1S) Rabbit mAbRabbit Anti-rat IgM/Cy5  Cy5标记的兔抗大鼠IgM

洛沙坦/氯沙坦SignalSilence® γ-Catenin siRNA I (Mouse Specific)Rabbit Anti-rat IgM/Cy3  Cy3标记的兔抗大鼠IgM
海水派琴虫PCR检测试剂盒说明书人美洲商陆素(PWM)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：1公斤

人免疫反应性生长激素(irGH)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃350ku

人免疫核糖核酸(Irna)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：保存：-20℃1克

人免疫球蛋白AFc段受体Ⅰ(FcαRⅠ/CD89)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：1克

人免疫球蛋白A(IgA)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：保存：-20℃100毫克

人免疫球蛋白EFc段受体Ⅱ(FcεRⅡ/CD23)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：500克

人免疫球蛋白E(IgE)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：50毫克

人免疫球蛋白GFc段受体Ⅰ(FcγRⅠ/CD64)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：10毫克
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。