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羊口疮病毒PCR检测试剂盒规格

羊口疮病毒PCR检测试剂盒规格

产品简介:羊口疮病毒PCR检测试剂盒规格
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GCK检测试剂盒对已开封的标准品(对照品)管理方面的问题应做严格的规定,不应同未开封的标准品(对照品)放在一起继续使用

产品型号:50T

浏览次数:32

更新时间:2021-03-13

产品厂地:上海市

详情介绍
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注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。

 产品名称

 羊口疮病毒PCR检测试剂盒规格

 英文名称

 Orf Virus(ORFV)PCR

 货号

 LZP7084

组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。

实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。
Streptokinase recombinantD-果糖-6-磷酸二钠,二 98%印刷标签,用于100G(ML)包装,尺寸:94mm*55mm

Phosphotransacetylase from Bacillus stearothermophilus钙荧光探针FIuo,3-AM 70%印刷标签,用于500G(ML)及以上包装,尺寸:   105mm*86mm

Casein荧蒽 分析标准品印刷标签,超大号, 95mm*210mm

Casein Na saltD-半乳糖 分析标准品印刷标签,大号,尺寸: 62mm*150mm

Heparin sodium salt羟基乙酰胺 98%印刷标签,中号, 42mm*98mm

Heparin lithium三油酸甘油酯 99%印刷标签,小号, 25mm*100mm

SPA戊二酰氯 97%印刷标签,超小号,尺寸: 18mm*100mm

Collagen甘草次酸(α型) 分析标准品,>98%21mm空白小标签 21mm

BSAN-(γ-L-谷氨酰)-1-萘胺 BR阿拉丁免检小标签 125mm*32mm

OVAL-甘油酸钙盐,一 97%阿拉丁免检大标签 160mm*60mm

HASDL-甘油 90%有此处开封 标签 140*20mm

Avidin(chiken egg white)甘氨脱氧胆酸 97%内有货单此处开封 标签 140*20mm

Streptavidin葡萄糖 standard for GC, ≥99.5% (GC)易碎物品 标签 150*120mm

Methyl albumin葡萄糖 分析标准品L-乳酸钙 USP级

Hb胰高血糖素氢氯化物(人) ≥97.0% (HPLC)(-)-乳酸乙酯 98%

Hb羟基萘酚蓝 IND,94%(HPLC)(-)-乳酸乙酯 99%

硫酸链霉素IFN- Gamma(Interferon Gamma)Ag-mouse、rat  干扰素-γ多肽抗原(大、小鼠)SKAR  DNA聚合酶δ相互作用蛋白3抗体

硫酸链霉素(标准品)IFN- Gamma(Interferon Gamma)Human  干扰素-γ多肽抗原(人)SKALP/Elafin  弹性蛋白酶抑制剂抗体

硫酸双氢链霉素IFN- Beta (Interferon Beta)Anti-mouse,rat  干扰素-β抗原SKA3  纺锤体和着丝粒相关蛋白3抗体

双氯芬酸钠IFN- Beta (Interferon Beta) human  干扰素-β抗原SKA2  纺锤体和着丝粒相关蛋白2抗体

双氯芬酸钠(标准品)PSCA  前列腺干细胞抗原SKA1  纺锤体和着丝粒相关蛋白1抗体

加巴喷丁ADH/AVP peptide  抗利尿激素/血管升压素抗原(和肽素)SISP1/GI24  应激诱导分泌蛋白1抗体

加巴喷丁(标准品)PRRSV M protein  猪蓝耳病病毒M蛋白SIRT7  沉默调节样蛋白SirT7抗体

多潘立酮Newcastle disease virus/HRP  鸡新城疫疫苗(鸡瘟4型混合病毒)偶联辣根过氧化物酶SIRT6  沉默调节相关蛋白6抗体

多潘立酮(标准品)sIgA  大鼠分泌型IgA(抗原)SIRT5  沉默调节蛋白5抗体

帕潘立酮Melamine/KLH  三聚氰胺与血蓝蛋白偶联物SIRT4/SIR 2 like protein 4  沉默调节相关蛋白4抗体
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检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。

 



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