幼虫芽孢杆菌PCR检测试剂盒规格

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
​
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
2,2′-O-Cyclouridine叔丁基亚磺酰氯 97%顺-6-壬烯  95%

2′-BrdU二甲基烯酸四乙二酯 包含~0.006% 对苯二酚 稳定剂, 90%顺-6-壬烯  95%,FG

2′-O-Methyl-Uridine硫链丝菌肽 90%丁位壬内酯  98%

2′-Azido-2′-deoxyuridine三苯基硅乙炔 98%乙酸橙花酯  95%

2-FDU四(THF) 无级,≥99.9%, 无稳定剂正辛 AR,99.0%

2-FDC三乙烯四胺 Standard for GC1-辛 99%

Ara-A原甲酸*酯 99.8%，无级1-辛 97%

Ara-C盐酸硫胺 分析标准品罗勒烯  90%

Uracil 1-β-D-arabifuraside2,3,5-三酚 分析标准品桂酸苯乙酯 96%

1-β-D-Arabifurasylthymine1,1,1-三(羟甲基)乙烷 97%3-苯 99%

Trifluorothymidine三氟磺酰氯 99%3-苯 ≥98%, FCC

Cyclo-C十三 97%3-苯酸 GR，99%

RNA四丁基氢氧化铵 ~40% 溶液，离子色谱级3-苯 95%

t-RNA2,4,5-三氯苯酚 分析标准品3-苯 ≥95%,  FCC

RNA-Na甲基叔戊基 97%异丁酸苯氧基乙酯 98%

DNADL-α-酚琥珀酸酯 分析标准品异丁酸苯氧基乙酯 ≥98%, FCC

子囊霉素Tri-Methyl-Histone H3 (Lys4) (C42D8) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjugate)S100A6  S100钙结合蛋白A6抗体

子囊霉素（标准品）Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb (APC Conjugate)S100A4  S100A4抗体

阿扎那韦XPD (D3Z6I) Rabbit mAbS100A14  S100A14/15抗体

阿扎那韦（标准品）Human IL-4 Neutralizing (D20H1) Rabbit mAbS100A13  S100A13抗体

盐酸托莫西汀LIN28B (D4H1) Rabbit mAbS100A11  S100钙结合蛋白A11抗体

盐酸托莫西汀(标准品)BRM (D9E8B) XP® Rabbit mAbS100A10  S100钙结合蛋白A10抗体

阿托伐醌,阿托喹酮BRM (D9E8B) XP® Rabbit mAbS-100/S100A1  S100A1抗体

阿托伐醌,阿托喹酮（标准品）COX IV (4D11-B3-E8) Mouse mAbS100 alpha 2  S100A2抗体

阿西替尼SignalSilence® ADAM9 siRNA IRYBP/APAP1/CD337  凋亡相关蛋白1抗体

阿扎哌隆Mouse TNF-α Neutralizing (D2H4) Rabbit mAbRyadine Receptor  心肌兰尼碱受体抗体（脑肌兰尼碱受体）
幼虫芽孢杆菌PCR检测试剂盒规格人抗多发性肌炎硬皮病抗体(PM-Scl/PM-1)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：25毫升

人抗纺锤体抗体(MSA)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：25克

人抗肺泡基底膜抗体(ABM-Ab)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：100克

人抗风疹病毒IgG抗体(anti-RVIgG)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：100克

人抗风疹病毒IgM抗体(anti-RVIgM)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：保存：-20℃10毫克

人抗副流感病毒IgG抗体(anti-PIVIgG)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃5片

人抗副流感病毒IgM抗体(anti-PIVIgM)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：10个

人抗钙蛋白酶抑素抗体(ACAST-DⅣ)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：5000u
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。