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奥利华斯病毒PCR检测试剂盒规格

奥利华斯病毒PCR检测试剂盒规格

产品简介:奥利华斯病毒PCR检测试剂盒规格
上海联祖生物相关产品:
CYP21B检测试剂盒 储存条件:低温运输,-20℃避光保存,有效期半年。

产品型号:50T

浏览次数:43

更新时间:2021-03-13

产品厂地:上海市

详情介绍
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注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。

 产品名称

 奥利华斯病毒PCR检测试剂盒规格

 英文名称

 Oliveros virus(OLVV)RTPCR

 货号

 LZP7080

组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。

实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。
MDH3,3'-二甲基联萘胺 97%2-氯-1,3-二甲基氯化咪唑鎓 90%

Myokinase2.4-二酚 分析标准品()氯代二哌啶碳鎓六氟磷酸盐 98%

NeuraminidaseO,O-二乙基硫代磷酸盐 98%氯代三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐 98%

Polyphel oxidase1-(3-二甲氨基基)-3-乙基碳二亚胺 97%多肽试剂TCTU 98%

PK2′-脱氧胞苷-5′-磷酸二钠盐 98%2-氯-1,3-二甲基咪唑六氟磷酸盐 98%

Tyrosine decarboxylase2′-脱氧腺苷-5′-单磷酸 98%3-(二乙氧基磷酰氧基)-1,2,3-苯并三-4-酮 98%

UAO2,2-二苯基乙 99%代磷酸二乙酯 纯度 ≥90%

Urokinase3,5-二氟苄胺 97%2-(2-吡啶酮-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟酸盐  99%

Fibrilysin4,4'-二氨基二苯甲酮 98%N,N'-二环己基碳二亚胺 99.0%

Chitinase3-羟基-D-酪氨酸 98%N,N'-琥珀酰亚胺基碳酸酯 98%

HSD1,4-二氢-2-甲酸 95%4-二甲氨基吡啶 99%

Sarcosine Oxidase6,8-二羟基芘-1,3-二磺酸二钠盐 97%4,4'-二甲氧基三苯基氯 98%

Creatininase amidohydrolase2,2'-二喹啉-4,4'-二羧酸 90%4,5-二基咪唑 98%

CRH二氯三(1,10-邻二氮杂菲)钌(Ⅱ),合 98%4,5-二基咪唑 99%

SAHH2,6-二氯-3-(三氟甲基)吡啶 98%二吡咯烷基(N-琥珀酰亚氨氧基)碳六氟磷酸盐  98%

Purine-nucleoside phosphorylase1,3-二氯四甲基二硅氧烷 97%4-(4,6-二甲氧基三)-4-甲基吗啉盐酸盐 97%

妥布霉素PIBF(progesterone induced blocking factor)  孕激素诱导阻断因子(抗原)SLC7A9  离子转运相关蛋白SLC7A9抗体

妥布霉素(标准品)PIWIL1(piwi-like 1)  piwi 样1蛋白(抗原)SLC6A19  依赖钠钙交换蛋白6

硫酸妥布霉素PPAR Gamma (peroxisome proliferator-activated receptor-gamma)  过氧化酶活化增生受体γ(抗原)SLC5A8  钠转运体蛋白8抗体

硫酸妥布霉素(标准品)PP2Ac  蛋白磷酸酶4(抗原)Slc4a7/Nbcn1  碳酸氢钠协同转运蛋白4-A7抗体

托萘酯Runx3  一种新发现的抑癌基因(抗原)SLC4A4  碳酸氢钠协同转运蛋白4-A4抗体

拓扑替康盐酸盐RRAD (Ras-related associated with diabetes )  RRAD(多肽抗原)SLC44A1/CD92  溶质转运蛋白家族44成员1抗体

拓扑替康盐酸盐(标准品)SDF-1/CXCL12 (stromal cell derived factor-1)  基质细胞衍生因子-1(抗原)SLC40A1/FPN1  细胞膜铁转运蛋白FP1抗体

托拉塞米shank1(SH3 and multiple anleyrin repead domins protein 1)  shank1多肽抗原SLC40A1  细胞膜铁转运蛋白FP1抗体

曲沃前列素slc22A17 (solute carrier famili 22)  溶质转运蛋白家族22成员17(多肽抗原)SLC39A7  转运蛋白家族39成员7抗体

盐酸曲唑酮SLC24A5 (solute carrier family 24, member 5)  可溶性载质转运蛋白SLC24A5(抗原)SLC39A6  SLC39A6抗体
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检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。

 



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