尼帕病毒PCR检测试剂盒说明书

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注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
L-Phenylalanil小鼠肠平滑肌细胞*培养基2,5-二甲基-2,5-双(过氧化叔丁基)-3-己炔 试剂级

D-Phenylalanil小鼠肠粘膜上皮细胞*培养基乙酸异戊酯 AR，99%

D-Phenylglycil小鼠肠动脉内皮细胞*培养基过氧化十二酰 98%

D-Prolil小鼠肠静脉内皮细胞*培养基过硫酸钠 99.99% metals basis

L-Methionionl小鼠肝实质细胞*培养基四苯钠 AR,99%

L-Threonil小鼠肝动脉内皮细胞*培养基四苯钠 99.5%

L-Valil小鼠肝动脉平滑肌细胞*培养基2,5-二甲基-2,5-双-（叔丁基过氧）己烷 93%

L-Isoleucil小鼠小肠血管内皮细胞*培养基正丁 GR（）

D-Tryptophal小鼠小肠隐窝上皮细胞*培养基异丁 99%()

(R)-(−)-Leucil小鼠肝内胆管上皮细胞*培养基异丁 Standard for GC, ≥99.5% (GC)

Boc-L-asparagine小鼠胃粘膜上皮细胞*培养基聚烯酰胺 非离子型，分子量：200万-1400万

Boc-D-asparagine小鼠肝窦内皮细胞*培养基磷酸三苯酯 分析标准品,≥99.8%(GC)

Boc-Asp-OH小鼠肝星形细胞*培养基磷酸三苯酯 CP

Boc-D-Asp-OH小鼠直肠平滑肌细胞*培养基磷酸三苯酯 98%

Boc-L-glutamine小鼠小肠平滑肌细胞*培养基磷酸*酚酯 99%

Boc-D-glutamine小鼠结肠平滑肌细胞*培养基环胞霉素A 98%

氯替泼诺VEGFR-3(Vascular Epidemal growth factor receptor-3)  血管内皮细胞生长因子受体-3抗原STAT4  信号转导和转录激活因子4抗体

氯替泼诺(标准品)VWF (Von Willebrand Factor)  血管假性血友病因子/血管性血友病因子抗原STAT3  信号转导和转录激活因子3抗体

洛伐他汀Wnt1  信号通路Wnt1抗原STAT2  信号转导和转录激活因子2抗体

洛伐他汀(标准品)WWOX (WW domain-containing oxidoreductase)  包含氧化还原酶的WW域抗原STAT1  信号转导与转录激活因子1抗体

卢比前列腺素/卢比前列酮XIAP(X-linked Inhibitor of Apoptosis Protein)  X-连锁凋亡蛋白/性连锁凋亡抑制蛋白抗原STARD8  GTP酶激活因子STARD8抗体

赖氨酸加压素；赖氨加压素XAF1(XIAP-associated factor 1)  XIAP相关因子1凋亡抑制蛋白抗原STARD5  促黄体激素诱导蛋白5抗体

醋酸M肽XRCC1(X-ray Repair Cross Complementing 1)  X射线修复交叉互补蛋白/细胞碱基切除修复基因抗原StAR/StARD1  促黄体激素诱导蛋白抗体

盐酸甲氯芬酯ZO-1 peptide  胞质紧密粘连蛋白1抗原Staphyloccocus aureus Rosenbach tropina  金黄色葡萄球菌菌体蛋白抗体

盐酸甲氯芬酯(标准品)Ag-ARC(ARG3.1/ARC, Activity-regulated cytoskeleton-associated protein)  ARC(多肽抗原)Stanniocalcin 1  斯钙素抗体

安宫Angiotensin II receptor(Ang II )  血管紧张素Ⅱ受体(抗原)STAM  信号转导衔接蛋白1抗体
尼帕病毒PCR检测试剂盒说明书人抵抗素(Resistin)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：保存：-20℃100毫克

人第八因子相关抗原(FⅧAg)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃1克

人电子转移黄素蛋白β肽(ETFB)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：10克

人淀粉样前体蛋白(βAPP)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃1克

人凋亡蛋白酶激活因子1(Apaf-1)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃1克

人凋亡相关半胱氨酸肽酶4(Casp4)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：5毫克

人凋亡相关因子(FAS/CD95)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃5克

人凋亡相关因子配体(FASL)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：5克