恩杜姆病毒PCR检测试剂盒说明书

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
L-Phenylglycil人胎盘羊膜细胞*培养基乙酸乙酯 AR,99%

DL-Phenylglycil人胎盘滋养层细胞*培养基乙酸乙酯  for HPLC, >99.0%(GC)

L-Proline人胎盘绒毛膜细胞*培养基甲溶液 AR,含10-15% 甲稳定剂

D-Proline人平滑肌细胞*培养基甲 Standard for GC，>99.9%

DL-Proline人成纤维细胞*培养基甲 AR，99.5%

BOC-L-Proline人卵巢上皮细胞*培养基甲 CP，99.5%

BOC-D-Proline人卵巢成纤维细胞*培养基甲 AR,无级

L-Hydroxyproline人卵巢微血管内皮细胞*培养基甲  for HPLC, ≥99.9%

L-Threonine人内膜上皮细胞*培养基甲 农残级, ≥99.9%

D-Theronine人颈上皮细胞*培养基甲  ≥99.9%(GC)

DL-Theronine人支持细胞*培养基甲 ACS

BOC-L-Threonine人肾小球内皮细胞*培养基甲 分析标准品，99.9%

CBZ-L-Threonine人肾管状上皮细胞*培养基甲 电子级

L-Tryptophan人肾皮层上皮细胞*培养基甲 ACS 光谱级, ≥99.9%

D-Trytophan人肾上皮细胞*培养基甲 LC-MS，≥99.9%

DL-Trytophan人输尿管上皮细胞*培养基甲   色谱级+, ≥99.9%

顺铂（标准品）PKA(Protein Kinase A)  蛋白激酶A(多肽)TFPI/LACI  组织因子途径抑制剂抗体

酞普兰PLAU/uPA (Plasmigen activator,urokinase)  尿激酶型纤溶酶原激活因子（多肽）TFF3  三叶肽因子3抗体

西酞普兰（标准品）Podoplanin Protein  平足蛋白抗原TFF2  三叶肽因子2抗体

克拉曲滨,克拉利宾Pokemon (POK Erythroid Myeloid Ontogenic factor)  “蒙”蛋白又称“曼”蛋白TFF1/BCEI  癌雌激素诱导蛋白抗体

克拉霉素Polycystin 1(Polycystic Kidney Disease 1)  多囊肾蛋白1抗原TFEB  T淋巴细胞转录调节因子TFEB抗体

克拉霉素（标准品）Polycystin 2(polycystic kidney disease 2)  多囊肾蛋白2抗体TFE3  转录因子E3

克林霉素磷酸酯phospho-AKT1/PKB1/2/3(pThr473)peptide  磷酸化蛋白激酶B抗原（丝氨酸磷酸化位点：473）TFDP3  转录因子DP3抗体（肝癌相关抗原661）

克林霉素磷酸酯(标准品)RKIP(Raf kinase inhibitor protein)  Raf激酶抑制蛋白抗原TFDP2/DP2  转录因子E2F二聚体蛋白2抗体

酸氯倍他索pre-X protein[Hepatitis B virus]N-Terminus  乙肝病毒pre-X蛋白抗原（N端）TFCP2C  转录因子CP2抗体

克罗拉滨/氯法拉滨pre-X protein(CT)[Hepatitis B virus C-Terminus]  乙肝病毒pre-X蛋白抗原（C端）TFAR19/PDCD5  凋亡相关蛋白5抗体
恩杜姆病毒PCR检测试剂盒说明书人表面膜免疫球蛋白D(mIgD)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：RT200毫升

人表面膜免疫球蛋白M(mIgM)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：5克

人表皮角蛋白(EK)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：保存：-20℃1克

人表皮生长因子(EGF)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：500克

人丙氨酸转氨酶/谷丙转氨酶(ALT/GPT)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃5克

人丙二(MDA)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：1米

人丙酸激酶(PK)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：25克

人丙酸激酶M2型同工酶(M2-PK)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：500支/包
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。