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恩杜姆病毒PCR检测试剂盒说明书

恩杜姆病毒PCR检测试剂盒说明书

产品简介:恩杜姆病毒PCR检测试剂盒说明书
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RNASE检测试剂盒对于悬浮细胞,500-1000g离心5min收集细胞。保存环境:2-8℃低温、避光、防潮

产品型号:50T

浏览次数:45

更新时间:2021-03-13

产品厂地:上海市

详情介绍
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注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。

 产品名称

 恩杜姆病毒PCR检测试剂盒说明书

 英文名称

 Ndumu VirusRTPCR

 货号

 LZP7047

组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。

实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。
L-Phenylglycil人胎盘羊膜细胞完全培养基乙酸乙酯 AR,99%

DL-Phenylglycil人胎盘滋养层细胞完全培养基乙酸乙酯  for HPLC, >99.0%(GC)

L-Proline人胎盘绒毛膜细胞完全培养基甲溶液 AR,含10-15% 甲稳定剂

D-Proline人平滑肌细胞完全培养基甲 Standard for GC,>99.9%

DL-Proline人成纤维细胞完全培养基甲 AR,99.5%

BOC-L-Proline人卵巢上皮细胞完全培养基甲 CP,99.5%

BOC-D-Proline人卵巢成纤维细胞完全培养基甲 AR,无级

L-Hydroxyproline人卵巢微血管内皮细胞完全培养基甲  for HPLC, ≥99.9%

L-Threonine人内膜上皮细胞完全培养基甲 农残级, ≥99.9%

D-Theronine人颈上皮细胞完全培养基甲  ≥99.9%(GC)

DL-Theronine人支持细胞完全培养基甲 ACS

BOC-L-Threonine人肾小球内皮细胞完全培养基甲 分析标准品,99.9%

CBZ-L-Threonine人肾管状上皮细胞完全培养基甲 电子级

L-Tryptophan人肾皮层上皮细胞完全培养基甲 ACS 光谱级, ≥99.9%

D-Trytophan人肾上皮细胞完全培养基甲 LC-MS,≥99.9%

DL-Trytophan人输尿管上皮细胞完全培养基甲   色谱级+, ≥99.9%

顺铂(标准品)PKA(Protein Kinase A)  蛋白激酶A(多肽)TFPI/LACI  组织因子途径抑制剂抗体

酞普兰PLAU/uPA (Plasmigen activator,urokinase)  尿激酶型纤溶酶原激活因子(多肽)TFF3  三叶肽因子3抗体

西酞普兰(标准品)Podoplanin Protein  平足蛋白抗原TFF2  三叶肽因子2抗体

克拉曲滨,克拉利宾Pokemon (POK Erythroid Myeloid Ontogenic factor)  “蒙”蛋白又称“曼”蛋白TFF1/BCEI  癌雌激素诱导蛋白抗体

克拉霉素Polycystin 1(Polycystic Kidney Disease 1)  多囊肾蛋白1抗原TFEB  T淋巴细胞转录调节因子TFEB抗体

克拉霉素(标准品)Polycystin 2(polycystic kidney disease 2)  多囊肾蛋白2抗体TFE3  转录因子E3

克林霉素磷酸酯phospho-AKT1/PKB1/2/3(pThr473)peptide  磷酸化蛋白激酶B抗原(丝氨酸磷酸化位点:473)TFDP3  转录因子DP3抗体(肝癌相关抗原661)

克林霉素磷酸酯(标准品)RKIP(Raf kinase inhibitor protein)  Raf激酶抑制蛋白抗原TFDP2/DP2  转录因子E2F二聚体蛋白2抗体

酸氯倍他索pre-X protein[Hepatitis B virus]N-Terminus  乙肝病毒pre-X蛋白抗原(N端)TFCP2C  转录因子CP2抗体

克罗拉滨/氯法拉滨pre-X protein(CT)[Hepatitis B virus C-Terminus]  乙肝病毒pre-X蛋白抗原(C端)TFAR19/PDCD5  凋亡相关蛋白5抗体
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检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。

 



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