犬新孢子虫PCR检测试剂盒说明书

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
​
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
β-Alanine methyl ester hydrochloride大鼠神经胶质细胞*培养基间硝苯 GR,99.0%

L-Aspartic acid dimethyl ester hydrochloride大鼠海马神经元细胞*培养基对甲苯胺 AR,99.0%

D-Aspartic acid dimethyl ester hydrochloride大鼠脑微血管内皮细胞*培养基对甲苯胺 99.7%

L-Aspartic acid β-methyl ester hydrochloride大鼠脑成纤维细胞*培养基间甲苯胺 GR,99%

L-Histidine methyl ester dihydrochloride大鼠神经小胶质细胞*培养基间甲苯胺 CP

DL-Alanine methyl ester hydrochloride大鼠雪旺氏细胞*培养基间甲苯胺 分析标准品，>99.7%

DL-Serine methyl ester hydrochloride大鼠小脑颗粒细胞*培养基土霉素  97%

L-Cysteine ethyl ester hydrochloride大鼠嗅鞘细胞*培养基1,1-二甲硫基硝基乙烯 98%

L-Tyrosine ethyl ester大鼠视网膜微血管内皮细胞*培养基2-溴-3-甲基吡啶 97%

DL-Alanine ethyl ester hydrochloride大鼠小梁网细胞*培养基5-溴-2-氟吡啶 98%

D-phenylglycine ethyl ester•HCl大鼠视网膜色素上皮细胞*培养基(R)-(+)-N-叔丁氧羰基-3-氨基吡咯烷 97%

L-Arginine methyl ester dihydrochloride大鼠视网膜muller细胞(s)-(-)-N-叔丁氧羰基-3-氨基吡咯烷 98%

L-Tyrosine tert-butyl ester大鼠虹膜色素上皮细胞*培养基氯代二苯基膦 97%

N-Acetyl-L-tryptophan大鼠晶状体上皮细胞*培养基5-氯-2-氟吡啶 99%

N-Acetyl-L-isoleucine大鼠角膜上皮细胞*培养基二苯基次膦酰氯 98%

N-Acetyl-L-lysine大鼠角膜内皮细胞*培养基二苯基磷酸 99%

盐酸伊立替康,(CPT-11)TRAF3/CD40bp (CD40 binding protein)  肿瘤坏死因子受体相关蛋白3抗原SUGT1  SUGT1蛋白抗体

盐酸伊立替康（标准品）TRAF6 (TNF receptor-associated factor 6)  肿瘤坏死因子受体相关因子6抗原SUFU/Suppressor of Fused  抑制Hh信号通路蛋白SUFU抗体

硝酸异康唑TRAIL/Apo2L (tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand)  肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体/凋亡素2配体抗原Substance P Receptor/NK1R  P物质受体抗体

硝酸异康唑(标准品)TRBF1 (Telomeric repeat binding factor 1)  端粒体复制结合因子1抗原Substance P  P物质抗体

异维A酸TRIM32(tripartite motif protein 32)  TRIM32抗原Styk1  丝氨酸/苏氨酸/酪氨酸激酶STYK1抗体

异维A酸（标准品）Trop-2/Tpm2 peptide  原肌球蛋白抗原STXBP1/Munc18  神经突触前膜胞内蛋白18抗体

美罗培南TSARG4(Testis and spermatogenesis related gene 4)  生精细胞凋亡相关基因4抗原streptomycin  链霉素抗体

美罗培南(标准品)TSGF(Tumor Specific Growth Fanctor)  恶性肿瘤特异性生长因子抗原Streptokinase  链激酶抗体

硫酸卡那霉素CIDEB peptide  CIDEB抗原Streptococcus suis 2  小鼠抗2型猪链球菌菌体蛋白抗体

硫酸卡那霉素(标准品)Tsg101(Tumor susceptibility gene 101 protein)  Tsg101抗原Streptococcus suis 2  2型猪链球菌菌体蛋白抗体
犬新孢子虫PCR检测试剂盒说明书人蛋白二化物异构酶前体(PDI)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：500毫升

人蛋白激酶A(PKA)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：RT，避光5克

人蛋白激酶B(PKB)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：RT25克

人蛋白激酶C(PKC)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：RT1克

人蛋白聚糖(PG)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：25克

人蛋白酪氨酸激酶(PTK/CD115)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：RT10克

人蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP/PTPase/CD148)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：500克

人蛋白磷酸酶(PP)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：5克
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。