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脑膜炎奈瑟菌PCR检测试剂盒说明书

脑膜炎奈瑟菌PCR检测试剂盒说明书

产品简介:脑膜炎奈瑟菌PCR检测试剂盒说明书
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产品型号:50T

浏览次数:32

更新时间:2021-03-13

产品厂地:上海市

详情介绍
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注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。

 产品名称

 脑膜炎奈瑟菌PCR检测试剂盒说明书

 英文名称

 Neisseria meningitidisPCR

 货号

 LZP7051

组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。

实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。
DL-Serine人前脂肪细胞完全培养基4-乙基苯甲 ≥97%

N-Acetyl-DL-Serine人脑动脉血管内皮细胞完全培养基六氟乙酰酮 98%

D-Cycoloserine人脑动脉血管平滑肌细胞完全培养基3,4,5-三氟苯酸 97%

L-Seril人脑静脉血管内皮细胞完全培养基3,4,5-三氟苯酚 98%

NAC人脑静脉血管平滑肌细胞完全培养基2-(2-溴乙基)-1,3-二恶烷 98%

ATEE人脑膜细胞完全培养基2-羟甲基-3,4-二氢吡喃 97%

N-Acetyl-DL-Alanine人神经元细胞完全培养基对羟基苯甲酸丁酯 99%

NAN人神经少突起前质胶质细胞完全培养基尼泊金乙酯 AR,99%

L-Tyrosine ethyl ester hydrochloride人神经星形胶质细胞完全培养基乙二苯 98%

L-Pyroglutamic acid人神经小胶质细胞完全培养基6-羟基-2-萘甲酸 98%

DL-Pyroglutamic acid人脑微血管内皮细胞完全培养基对羟基苯甲酸 99%

CBZ-L-Pyroglutamic acid人脑成纤维细胞完全培养基对羟基苯甲酸 ≥99%

Phosphoramidon disodium salt人小脑颗粒细胞完全培养基4-羟基苯甲酸异丁酯 99%

Glycyl-L-glutamine人晶状体上皮细胞完全培养基4-羟基苯甲酸异酯 99%

Alu-Gln人角膜上皮细胞完全培养基对羟基苯甲酸甲酯钠 99%

Gly-Leu人视网膜色素上皮细胞完全培养基对羟基苯甲酸甲酯钠 Ph Eur

去氨加压素;去氨压素SCN9A/NAV1.7(Sodium channel protein type 9 subunit alpha)  电压开启的钠离子通道SCN9A抗原TBX-5  转录因子Tbx5抗体

莫匹罗星,假单胞菌酸CXCL14(CXC-chemokine ligand 16)  CXC趋化因子14抗原TBX3  转录因子Tbx3抗体

匹伐他汀叔丁酯CXCL16 peptide  CXC趋化因子16抗原Tbx21/T-bet  T细胞介导的转录调节因子Tbx21抗体

己烯雌酚()Sema3A (semaphorin 3A)  臂板蛋白3A(多肽)TBX2/T-box2  血栓素B2抗体(一种新发现的抑癌基因)

己烯雌酚()(标准品)Sema3F (semaphorin 3F)  臂板蛋白3F抗原TBX2/T-box2  新型抑癌基因抗体

多烯紫杉无/多西他赛SFRP1(Secreted frizzled related protein 1)  分泌型卷曲相关蛋白1抗原TBX18  转录因子Tbx18抗体

多烯紫杉无/多西他赛(标准品)SGLT1(sodium-glucose cotransporter1)  钠-葡萄糖共转运载体1抗原TBX1/Brachyury  先心病相关蛋白TBX1抗体

多烯紫杉三合物Shadow/SPRN(Shadow of prion protein precursor)  新朊蛋白/朊蛋白相关蛋白/沙杜(Shadoo)蛋白抗原TBRG4  转化生长因子β调节蛋白4抗体

多烯紫杉三(标准品)Shiga-like toxin IIe variant subunit A 0139[Escherichia coli 0139]  大肠杆菌志贺样毒素Ⅱ型突变体(O139菌型)TBRG1  转化生长因子β调节蛋白1抗体

盐酸多奈哌齐III型Shiga-like toxin IIe variant subunit A[Escherichia coli 0139]  大肠杆菌志贺样毒素菌体蛋白(O139菌型)TBLR1/TBL1XR1  转导素β1X连锁受体蛋白1抗体
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检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。

 



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