欢迎进入上海联祖生物科技有限公司网站!
13482402338
产品中心

Product Center

当前位置:首页  -  产品中心  -  PCR试剂盒  -  PCR检测试剂盒  -  50T异源曼氏杆菌PCR检测试剂盒说明书

异源曼氏杆菌PCR检测试剂盒说明书

产品简介

异源曼氏杆菌PCR检测试剂盒说明书
上海联祖生物相关产品:
DUB检测试剂盒如果对本试剂盒有任何疑问,可和所购经销商L系

更新时间:2021-03-14
访问次数:260
详细介绍在线留言

注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。

 产品名称

 异源曼氏杆菌PCR检测试剂盒说明书

 英文名称

 Mannheimia varigenaPCR

 货号

 LZP6955

组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。

实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。
25羟基维生素D3(25 HVD3)elisa试剂盒Anti-Epigen 研究领域  细胞生物 免疫学

仓鼠可溶性血管细胞粘附分子1(sVCAM-1)elisa试剂盒Anti-EPDR1 研究领域  细胞生物 信号转导 细胞骨架 细胞外基质

人支气管平滑肌细胞报价Anti-ESAM 研究领域  细胞生物 免疫学 信号转导

801-D (人巨细胞性肺癌细胞)报价Anti-EMP3 研究领域  细胞生物 表观遗传学

P3/NSI/1-Ag4-1 NS-1 (小鼠骨髓瘤细胞)价格Anti-EPHA10 研究领域  肿瘤 细胞生物 免疫学 细胞类型标志物

新生儿表皮角化细胞*培养基报价Anti-EV71 polyprotein 3D 研究领域  细胞生物 免疫学

小鼠视网膜微血管内皮细胞*培养基现货供应Anti-EVC2 研究领域  细胞生物 免疫学 t-淋巴细胞 b-淋巴细胞

小鼠视网膜色素上皮细胞*培养基报价Anti-Emerin 研究领域  细胞生物 免疫学

小鼠虹膜色素上皮细胞*培养基现货供应Anti-ELF1/E74 like factor 1 研究领域  细胞生物 免疫学

青霉素-链霉素溶液(100×)说明书Anti-Ephrin B3 研究领域  细胞生物 免疫学

连翘酯苷E93675-88-8实验方法Anti-EBAG9/RCAS1 研究领域  细胞生物 免疫学

氯化木兰花碱6681-18-1*Anti-ELOVL6 研究领域  细胞生物 免疫学

苯唑西林钠使用说明书Anti-EphA6/Eph receptor A6 研究领域  肿瘤 免疫学 信号转导 表观遗传学

碱性蛋白酶价格Anti-EphA3/Eph receptor A3 研究领域  肿瘤 细胞生物 信号转导 结合蛋白 表观遗传学

2′-叠氮脱氧尿苷使用说明书Anti-EphA7/Eph receptor A7 研究领域  肿瘤 细胞生物 细胞骨架 细胞外基质

岩白菜素VTG(vitellogenin)  青鳉鱼卵黄蛋白 表皮生长因子受体IgG

盐酸育亨宾Apaf-1 (Apoptosis protease activating factor-1)(CT)  凋亡蛋白活性因子-1(抗原) 表皮生长因子受体IgG

野百合碱Apaf-1 (Apoptosis protease activating factor-1)(NT)  凋亡蛋白活性因子-1(抗原) 表皮生长因子受体III型突变体IgG

银杏内酯AAR (Androgen Receptor)peptide  雄激素受体(多肽抗原) 荧光素PE标记表皮生长因子受体IgG

异钩藤碱5-HTR2A  5-羟色胺受体2A抗原 金标记表皮生长因子受体IgG

银杏内酯Bthrombin/Prothrombin  凝血酶Ⅱ(凝血因子II)抗原 兔抗人、大、小鼠磷酸化表皮生长因子受体IgG

标准品5-HTR3(5-hydroxytryptamine (serotonin) receptor 3a)  5-羟色胺受体3抗原抗体

叶酸5-HTR4(5 hydroxytryptamine serotonin receptor 4)  5-羟色胺受体4抗原 兔抗人、大、小鼠磷酸化表皮生长因子受体IgG

银杏内酯CMuc2 peptide  粘蛋白-2/上皮膜抗原2抗原 真核翻译起始因子3FIgG

盐酸药根碱ADAMTS7 peptide  整合素样金属蛋白酶与凝血酶1型-7抗原 早期反应基因-1/应急反应生长基因1IgG
异源曼氏杆菌PCR检测试剂盒说明书大鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量:1米

大鼠淋巴细胞功能相关抗原3(LFA-3/CD58)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量:RT10克

大鼠淋巴细胞趋化因子(Lptn/LTN/XCL1)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量:1克

大鼠淋巴细胞因子ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量:RT100克

大鼠磷酸化蛋白激酶C(P-PKC)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量:100毫克

大鼠磷酸化核因子κB抑制蛋白α(pIKBα)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量:RT1米

大鼠磷酸化细胞外信号调节激酶(pERK)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量:2~8℃10克

大鼠磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量:100克
检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。

 

在线留言

留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7

TEL:021-61210612

扫码加微信