蜂房蜜蜂球菌PCR检测试剂盒说明书

注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
​
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
15mL DNA 离心超滤管 （90-150 KD）1个说明书Anti-EPOR 研究领域  细胞生物 免疫学 神经生物学

MnCl2溶液，25mM，PCR 级5mL品牌Anti-EphA4 R/Eph receptor A4 研究领域  细胞生物 发育生物学 神经生物学

石蜡油，PCR 级10mL多少钱Anti-EIF2AK2/PKR 研究领域  细胞生物 转录调节因子 转运蛋白

dTTP 溶液，100mM0.5mL哪里有卖Anti-phospho-eIF4E(Ser209) 研究领域  细胞生物 免疫学 发育生物学 表观遗传学

G（5´）ppp（5´）G 帽结构类似物25 OD说明书Anti-EPHB4 研究领域  心血管 免疫学

单细胞悬浮液1mL说明书Anti-ERK1/2(p44/42 MAPK) 研究领域  心血管 信号转导

真菌种属鉴定 PCR Mix 5100 次说明书Anti-Enkephalin/P-ENK 研究领域  肿瘤 心血管 信号转导

φX174RF Ⅱ DNA30μg说明书Anti-ERK4 研究领域  心血管 免疫学

菌落 PCR 试剂盒 2.050 次说明书Anti-ET-3/Endothelin 3 研究领域  心血管 信号转导 生长因子和激素 激酶和磷酸酶 泛素

素钠溶液 ,50mg/mL1mL多少钱Anti-ETS2 研究领域  肿瘤 心血管 信号转导

恶性疟PCR检测试剂盒保存Anti-ENaCg/γENaC 研究领域  细胞生物 神经生物学 信号转导

玉米MON810/MSPCR检测试剂盒说明书Anti-ERAS/HRAS2 研究领域  细胞生物 免疫学

转基因植物PAT基因PCR检测试剂盒说明书Anti-ETV7 研究领域  细胞生物 免疫学

人活化蛋白CElisa Kit说明书Anti-EEF2 研究领域  细胞生物 免疫学 细胞凋亡 细胞周期蛋白

小鼠乙酰胆碱转移酶Elisa Kit说明书Anti-EEF2k 研究领域  肿瘤 细胞生物 免疫学 细胞周期蛋白

银锻苷Immuglobuin binding protein-1(CD79A)IGBP-1  免疫球蛋白结合蛋白-1 雌激素受体IgG

3－乙酰基乳香酸CD133  造血干细胞抗原CD133 雌激素受体αIgG

3－乙酰基－11－酮CD133  造血干细胞抗原（多肽抗原） 抗人磷酸化雌激素受体αIgG

芫花素H5N1-H5  禽流感H5亚型全病毒 雌激素受体α/βIgG

野鹫尾苷Newcastle disease virus  鸡新城疫疫苗（鸡瘟4型混合病毒） 细胞核受体Rev-ErbαIgG

异甜菊SDF-1/CXCL12  基质细胞衍生因子1 磷酸化细胞核受体Rev-ErbαIgG

标准品Bacillus anthraci  炭疽杆菌菌体蛋白抗体

原阿片碱ADCY1 peptide  腺苷酸环化酶1多肽抗原 雌激素受体βIgG

异莲心碱c-erbB-2蛋白  c-erbB-2蛋白（抗原） 雌激素受体β IgG

α-亚油酸ChAT(Choline Acetyltransferase)  胆碱乙酰转移酶（抗原） 兔抗人、大、小鼠磷酸化雌激素受体αIgG
蜂房蜜蜂球菌PCR检测试剂盒说明书大鼠前列腺酸性磷酸酶(PAP)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：RT，避光5克

大鼠前列腺特异性抗原(PSA)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：100毫升

大鼠前心肽(Pro-ANP)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：25克

大鼠羟脯氨酸(Hyp)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：RT5克

大鼠趋化因子(fractalkine/CX3CL1)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：100毫克

大鼠去甲肾上腺素(NA)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：1克

大鼠全段甲状旁腺素(i-PTH)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：25克

大鼠固(ALD)ELISA试剂盒  *shēng huà shì jì  容量：2～8℃25毫升
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。