鸠宁病毒PCR检测试剂盒说明书上海联祖生物相关产品:ABCG2检测试剂盒建议选择EDTA或者柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,于1000×g离心15分钟,仔细收集上清
产品分类
PRODUCT CLASSIFICATION相关文章
RELATED ARTICLES注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 鸠宁病毒PCR检测试剂盒说明书 |
英文名称 | Junin Virus(JUNV)RTPCR |
货号 | LZP6899 |
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。
正磷酸〖铁〗四物使用说明书Anti-SLC5A3 Antibody研究领域 肿瘤 细胞生物 神经生物学 信号转导 激酶和磷酸酶
D-葡萄糖醛酸保存Anti-SLC6A15 Antibody研究领域 肿瘤 细胞生物 免疫学
28-表高油菜素内酯实验步骤Anti-SLC6A6 Antibody研究领域 肿瘤 细胞生物 免疫学 肿瘤细胞生物标志物
3-吲哚丁酸保存Anti-SLC5A6 Antibody研究领域 细胞生物 免疫学
5-肌苷二磷酸三钠盐使用说明书Anti-SLC6A16 Antibody研究领域 肿瘤 细胞生物 信号转导 细胞周期蛋白 表观遗传学
2′-氟脱氧胞苷价格Anti-SLC6A17 Antibody研究领域 细胞生物 免疫学 信号转导 生长因子和激素 细胞周期蛋白 转录调节因子 细胞分化 细胞外基质
柱式酱油 DNAout10 次多少钱Anti-SLC8A1 Antibody研究领域 细胞生物 免疫学 信号转导 细胞骨架 细胞外基质
柱式真菌 DNAout50 次哪里有卖Anti-SLC9A6 Antibody研究领域 心血管 细胞生物 免疫学 信号转导 干细胞 生长因子和激素 细胞周期蛋白 转录调节因子 内皮细胞
DNA 碱性胶上样液 ,6×1.5mL哪里有卖Anti-SLC9A7 Antibody研究领域 细胞生物 免疫学 细胞周期蛋白 转录调节因子 细菌及病毒 细胞分化
溴化乙锭溶液 ,10 mg/mL1.5mL哪里有卖Anti-SLC9A3R2 Antibody研究领域 细胞生物 免疫学
微量核酸沉淀剂10mL哪里有卖Anti-SLC9A8 Antibody研究领域 细胞生物 细胞周期蛋白 激酶和磷酸酶
柱式 DNA PAGE 胶回收试剂盒50 次哪里有卖Anti-SLCO1B1 Antibody研究领域 细胞生物 免疫学 淋巴细胞 b-淋巴细胞
超快非醇核酸沉淀剂100 次多少钱Anti-SLCO1A2 Antibody研究领域 细胞生物 免疫学 神经生物学
超级杂交液 B(含甲酰胺)100mL哪里有卖Anti-SLIT3 Antibody研究领域 肿瘤 细胞生物 免疫学
酵母 tRNA 溶液 B( 精提 )1.5mL多少钱Anti-SLIT2 Antibody研究领域 肿瘤 细胞生物 神经生物学
细菌学蛋白胨Anti-SHP2/PTPN11尿嘧啶
四硫磺酸钠煌绿(TTB)增菌液基础Anti-SIP1 欧前胡素
溶液Anti-Skp2 欧当归内酯A
0.1%煌绿溶液Anti-Slc22A17 欧夹竹桃苷
无菌四硫磺酸钠煌绿(TTB)增菌液Anti-SLC24A5 派立辛
EF-18 琼脂基础Anti-SLC6A19 蒲公英甾
培养基anti-Smac/DIABLO 标准品
新生霉素溶液SLC34A2/NaPi-2b 蟛蜞菊内酯
无菌采样袋/均质袋Anti-Smad2/3 菝葜皂苷元
1%碱性蛋白胨(APW)Anti-Smad4 辅酶Q10
鸠宁病毒PCR检测试剂盒说明书去整合素样金属蛋白酶11抗体Piplartine中文名:别名:分子式:C17H195
Pellitorine中文名:墙草碱别名:分子式:C14H25
去整合素样金属蛋白酶12抗体2-(4-Hydroxy-2-oxoindolin-3-yl)acetonitrile中文名:别名:分子式:C10H8N2O2
去整合素样金属蛋白酶15抗体1-Methoxyindole-3-carboxylic acid中文名:别名:分子式:C10H93
去整合素样金属蛋白酶2抗体Reserpine中文名:别名:分子式:C33H40N2O9
检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
(1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。