犬恶丝虫PCR检测试剂盒说明书上海联祖生物相关产品:IPO38检测试剂盒 NAP1 (nucleosome assembly protein 1) 核小体组装蛋白1(多肽)N-cadherin N-钙粘附分子抗原
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产品名称 | 犬恶丝虫PCR检测试剂盒说明书 |
英文名称 | Dirofilaria immitisPCR |
货号 | LZP6655 |
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。
人高灵敏度促甲状腺激素(U-TSH)elisa试剂盒Anti-B4GALT1 Antibody研究领域 染色质和核信号 细胞周期蛋白
人干扰素调节因子8(IRF8)elisa试剂盒Anti-B4GALT3 Antibody研究领域 细胞生物 免疫学 信号转导 激酶和磷酸酶
人八聚体转录因子(OTF2A)elisa试剂盒Anti-B4GALT5 Antibody研究领域 细胞凋亡
人γ干扰素诱导单核细胞因子(MIG/CXCL9)elisa试剂盒Anti-BACH2 Antibody研究领域 肿瘤 信号转导 细胞凋亡 细胞粘附分子 细胞分化
人Rho家族GTP酶1(RND1)elisa试剂盒Anti-BAG1 Antibody研究领域 肿瘤 细胞生物 神经生物学 信号转导 干细胞 细胞凋亡 细胞粘附分子 细胞分化
人Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶2(Rock-2)elisa试剂盒Anti-BAG4 Antibody研究领域 细胞生物 免疫学 细胞表面分子
人DNA损伤诱导转录因子4样蛋白(DDIT4/RTP801)elisa试剂盒Anti-BAGE2 Antibody研究领域 肿瘤 细胞生物 信号转导 细胞凋亡 转录调节因子 表观遗传学
人C多肽(CP)elisa试剂盒Anti-BAIAP2L1 Antibody研究领域 肿瘤 转录调节因子
人Alpha-D 生育酚/维生素E(Alpha-D TPL)elisa试剂盒Anti-BAGE3 Antibody研究领域 信号转导 细胞粘附分子 细胞骨架
绵羊基质金属蛋白酶9/明胶酶B(MMP9/Gelatinase B)elisa试剂盒Anti-BAGE4 Antibody研究领域 肿瘤 细胞生物 信号转导 细胞凋亡 转录调节因子 激酶和磷酸酶
鸡HSP90抗体(IgG)elisa试剂盒Anti-BAIAP2L1 Antibody研究领域 细胞生物 细胞膜受体
鸡HSP60抗体(IgG)elisa试剂盒Anti-BAIAP2L1 Antibody研究领域 细胞生物 染色质和核信号 信号转导 细胞凋亡 激酶和磷酸酶
大鼠肺炎病毒抗体(PV-Ab)elisa试剂盒Anti-BAIAP2L2 Antibody研究领域 肿瘤 细胞生物 免疫学 信号转导 细胞凋亡
大鼠α葡萄糖苷酶(a-Glu)elisa试剂盒Anti-BAIAP2L2 Antibody研究领域 细胞生物 免疫学 染色质和核信号 信号转导 激酶和磷酸酶
大鼠Ras相关C3肉毒素底物1(RAC1)elisa试剂盒Anti-BAK1 Antibody研究领域 细胞生物 细胞凋亡
3-甲氧基-4-硝基苯酚 二苯基乙氧基膦 (五苯基)二苯基磷
盐酸莫西沙星 (五苯基)二苯基磷 红荧烯
N,O-1,3-二乙酰基吲哚 红荧烯 4,4-双(5-甲基-2-苯并唑基)二苯
3-溴苯 4,4-双(5-甲基-2-苯并唑基)二苯 四溴对烯
3-Mercapto-1-hexal 3-巯基-1-己醇 51755-83-0
NICKEL(II) TE BASIC HYDRATE 碱式碳酸镍 12607-70-4
Nickel(II) nitrate hexahydrate 镍 13478-00-7
Nickel(II) acetate tetrahydrate 乙酸镍 6018-89-9
大鼠载脂蛋白C1(APOC1)ELISA试剂盒 ,英文名: APOC1 ELISA Kit
Mouse phosphotylisital 3 kinase (PI3K) ELISA Kit 小鼠磷酸肌醇3激酶(PI3K)ELISA试剂盒
MouseLeptin,LEPELISAkit 小鼠瘦素(LEP)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
CLIAKitforHumanfibromodulin,FMODELISAKit人纤调蛋白规格:48T/96T
细胞/组织高质纯化高尔基体分离试剂盒10次
ELISAKitMMP-5大鼠基质金属蛋白酶5规格:48T/96T
犬恶丝虫PCR检测试剂盒说明书3-Bromo-4-hydroxybenzaldehyde,97%通用试剂 5G
2-Methoxycinnamaldehyde, predominantly...通用试剂 50G
α-Bromocinnamaldehyde,98%通用试剂 25G
trans-4-Nitrocinnamaldehyde,≥97.0%通用试剂 1G
5-Bromo-2-thiophenecarboxaldehyde,95%通用试剂 5G
2,4-Dimethylbenzaldehyde,≥90%通用试剂 25G
4-(Diethylami)salicylaldehyde,98%通用试剂 5G
4-Formylbenzonitrile,95%通用试剂 5G
3-Formylbenzonitrile,98%通用试剂 1G
Ferrocenecarboxaldehyde,98%通用试剂 1G
Bicyclo[2.2.1]hept-5-ene-2-carboxaldeh...通用试剂 5G
Pyridoxal 5′-phosphate hydrate,≥98%通用试剂 1G
3,5-Dibenzyloxybenzaldehyde,98%通用试剂 1G
3-Bromobenzaldehyde,97%通用试剂 25G
4-Benzyloxybenzaldehyde,97%通用试剂 25G
检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
(1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。