熊峡谷病毒PCR检测试剂盒说明书

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

​

实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
小鼠牛小肠碱性磷酸酶（CIAP）elisa试剂盒Anti-GSTP1 Antibody研究领域 心血管 细胞生物 免疫学 神经生物学 信号转导 干细胞

小鼠淋巴细胞趋化因子（Lptn/LTN/XCL1）elisa试剂盒Anti-GSTP1 Antibody研究领域 肿瘤 心血管 细胞生物 免疫学

小鼠亮氨酸脑啡肽（Leu-ENK）elisa试剂盒Anti-GSTP1 Antibody(原货号PB0144)研究领域 免疫学 生长因子和激素 糖尿病

小鼠可溶性CD30配体（sCD30L）elisa试剂盒Anti-GYPA Antibody研究领域 肿瘤 心血管 细胞生物 免疫学 信号转导 合成与降解 细胞类型标志物 脂蛋白 新陈代谢 锌指蛋白

小鼠抗心肌抗体（AMA）elisa试剂盒Anti-GZMA Antibody研究领域 肿瘤 细胞生物 信号转导 转录调节因子 结合蛋白 表观遗传学

小鼠抗双链DNA抗体/天然DNA抗体（IgG）elisa试剂盒Anti-GUSB Antibody研究领域 细胞生物 信号转导 G蛋白偶联受体 G蛋白信号

小鼠饥饿激素（GHRL）elisa试剂盒Anti-GZMB Antibody研究领域 心血管 细胞生物 信号转导 细胞粘附分子 细胞外基质

小鼠果糖胺（FRA）elisa试剂盒Anti-GZMB Antibody研究领域 细胞生物 免疫学 神经生物学 干细胞 细胞类型标志物

小鼠多巴胺（DA）elisa试剂盒Anti-H1-0 Antibody研究领域 细胞生物 激酶和磷酸酶 淋巴细胞 细胞自噬

小鼠蛋白聚糖4（PRG4）elisa试剂盒Anti-H3C1 Antibody研究领域 细胞生物 神经生物学 信号转导 转录调节因子

小鼠促甲状腺素释放激素（TRH）elisa试剂盒Anti-HAS2 Antibody研究领域 细胞生物 信号转导 G蛋白偶联受体 G蛋白信号

小鼠雌二醇（E2）elisa试剂盒Anti-H2AFX Antibody研究领域 肿瘤 细胞生物 神经生物学 信号转导

小鼠补体片断3a（C3a）elisa试剂盒Anti-HAS1 Antibody研究领域 细胞生物 神经生物学 生长因子和激素 内分泌病

小鼠丙酮酸激酶M2型同工酶（M2-PK）elisa试剂盒Anti-HAVCR1 Antibody研究领域 发育生物学 信号转导 干细胞 细胞类型标志物 淋巴细胞

小鼠白介素1受体拮抗剂（IL1Ra/CD121）elisa试剂盒Anti-HAVCR1 Antibody研究领域 肿瘤 细胞生物 肿瘤细胞生物标志物

本二价酸氢钾potewwium xy7gen phthalateAR500g

SCT-150-A1.5 ml 螺口尖底冻存管(杂色)(带盖)127

HK391-100Gxy7xyetxyl Cellulose (HEC) 羟以级纤维素

Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit

癸酰基-N-甲基葡糖胺1g

1,3-丙二醇1,3-propanediolGCS2ml

JX03021000 μl 硅化吸头 袋装182

C1254-5GCholic aicd wo7ium Salt 胆酸钠

霍乱菌素1mg

UTP, Triwo7ium Salt

大鼠血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

人腺病毒3(ADV3)抗体(IgG)免疫试剂盒 Human ADV3 IgG ELISA Kit

丙二(MDA)测试盒 可见分光光度法 50管/48样

RatMotilin,MTLELISA试剂盒大鼠胃动素(MTL)ELISA试剂盒规格：96T/48T

HumanHepatitisCvirusIgM,HCV-IgMELISA试剂盒人丙型肝炎IgM(HCV-IgM)ELISA试剂盒规格：96T/48T

HumanL-SelectinELISAKit人L选择素(L-Selectin/CD62L)ELISA试剂盒规格：96T/48T
熊峡谷病毒PCR检测试剂盒说明书Ethyl lactate,≥98%通用试剂　100G

Methyl salicylate,≥98%通用试剂　100G

Ethyl palmitate,≥95%通用试剂　100G

Trimethyl phosphoacetate,98%通用试剂　25G

Tetraethyl orthosilicate,98%通用试剂　100ML

Propyl acetate,≥98%通用试剂　100G

Methyl salicylate,≥98%通用试剂　5ML

Phenyl acetate,99%通用试剂　100ML

Isoamyl butyrate,≥98%通用试剂　100G

Ethyl isovalerate,≥98%通用试剂　100G

Methyl oleate,99%通用试剂　5G

Ethyl oleate,98%通用试剂　5G

Butyl oleate,75%通用试剂　100ML

Methyl benzoate,≥98%通用试剂　100G

Isopropyl benzoate,99%通用试剂　25ML