荧光-PCR法中普通PCR和qPCR引物区别解析

　　荧光-PCR法中的普通PCR和qPCR引物设计原则有哪些区别呢？

　　一、二者的相同之处

　　序列的查找是一致的；

　　序列选取应在基因的保守区段；

　　选取合适的扩增片段大小

　　避免引物自身或与引物之间形成4个或4个以上连续配对；

　　避免引物自身形成环状发卡结构；

　　Tm值在55-65℃，GC含量在40%-60%；

　　引物之间的TM相差避免超过2℃；

　　引物的3’端避免出现3个或3个以上连续相同的碱基。

　　二、二者的不同之处

　　qPCR产物长度PCR要求在300bp以内，一般先选80-150bp之间；多对目的基因同时扩增，文献上查来的引物条件会不同，需要设计尽可能条件一致的引物；目的基因含量比较低时，需要设计灵敏度比较高的引物；相对电泳法，qPCR灵敏度比较高，对引物的要求更高，引物二聚体要少，熔解曲线要求单一产物；PCR的目的是进行定量或者相对定量，对扩增的效率有要求，对引物的二级结构要求高。

　　普通PCR引物根据实验的要求不同，长度一般是从150bp到几千bp不等；对二级结构要求没有qPCR高；对扩增效率要求不高；可选用梯度PCR仪，选择不同退火温度，对引物退火温度要求不需要一致。