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对荧光-PCR法的扩增曲线的解读

更新时间:2022-03-11点击次数:494
   荧光-PCR法技术已经被广泛应用于临床疾病诊断各种传染病诊断和疗效评价;临床疾病诊断动物疾病检测;食源微生物、食品过敏源、转基因研究等食品安全操作等等各个领域。目前的实时荧光PCR技术主要是基于荧光共振能量转移(FRET)的原理,一对合适的荧光物质可以构成一个能量供体(donor)和能量受体(acceptor)对,其中供体的发射光谱与受体的吸收光谱重叠,当它们在空间上相互接近到一定距离(1-10 nm)时,激发供体而产生的荧光能量正好被附近的受体吸收,使得供体发射的荧光强度衰减,受体荧光分子的荧光强度增强。
  荧光-PCR法试剂盒具有高特异性,与其他病毒无交叉反应,无非特异性扩增;检测灵敏度可达10-100拷贝;操作简便,该系列所有试剂均采用相同的体系和条件,可同时进行多个检测;多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。
  荧光-PCR法的扩增曲线一般分为基线期、指数增长期和平台期。在qPCR扩增早期,扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖,无法判断产物量的变化,此时即为基线期,PCR反应过程中产生的DNA拷贝数是呈指数形式增加的,随着反应循环数的增加,终PCR反应不再以指数形式生成模板,从而进入平台期,在该时期,扩增产物已不再呈指数级的增加,PCR的终产物量与起始模板量之间无线性关系,只有在荧光信号的指数增长期,PCR产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系,可以选择在这个阶段进行定量分析。

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