RT-PCR试剂盒检测RNA浓度和纯度说明

更新时间：2024-03-14

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RT-PCR试剂盒适用于以RNA为模板合成一链cDNA的反转录，以及后续的PCR扩增实验。本试剂盒选用优异的M-MLV RT酶，可以合成大于5kb的一链cDNA；反转录过程中的特异的RNase抑制剂可有效降低由于外源RNase污染而导致实验失败的风险。本试剂盒使用方便、快捷，可广泛用于cDNA克隆及目的基因检测等分子生物实验。

RNA浓度和纯度分析：

浓度计算：对于单链RNA，OD260＝1.0时，RNA浓度为40μg/ml，稀释时OD260＝0.1时，其RNA浓度为4μg/ml。

纯度分析：纯净的RNA样品其OD260/OD280的比值应介于1.8-2.0。小于此比值说明有蛋白或苯酚污染，如果比值大于2.0，则可能被异硫氰酸胍污染；OD260/OD230比值应大于2.0，如果小于此比值说明有小分子及盐类污染。

浓度测定：

使用RNA浓度测定仪，测定样品A260和A280值。根据A260/A280比值，估测RNA质量。一般A260/A280比值在1.8-2.0之间，可以满足实验要求。在100μl RNA原液中取1μl稀释至250μl（DEPC处理的水），测定样品的A260和A280的值，按下列公式计算其浓度：

RNA原液浓度=A260×稀释倍数×40（ng/μl）。

测定RNA浓度基本操作步骤：

1.取1μl RNA原液，放在0.5ml EP管中，加入249μl dd H2O，用移液枪反复混匀。

2.用dd H2O为空白对照，调节A260零点。

3.倒掉比色杯中的水，加入稀释并混合均匀的RNA样液，测定A260值。倒掉比色杯中的RNA样液，用dd H2O冲洗比色杯，再调节A280零点。

4.倒掉比色杯中的水，加入稀释并混合均匀的RNA样液，测定A280值。计算A260/A280比值，比值≥1.8，满足实验要求。

5.RNA原液浓度=A260×稀释倍数×40（ng/μl）。