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RT-PCR试剂盒检测RNA浓度和纯度说明

发布时间: 2021-06-17  点击次数: 78次
   RT-PCR试剂盒适用于以RNA为模板合成一链cDNA的反转录,以及后续的PCR扩增实验。本试剂盒选用优异的M-MLV RT酶,可以合成大于5kb的一链cDNA;反转录过程中的特异的RNase抑制剂可有效降低由于外源RNase污染而导致实验失败的风险。本试剂盒使用方便、快捷,可广泛用于cDNA克隆及目的基因检测等分子生物实验。
  RNA浓度和纯度分析:
  浓度计算:对于单链RNA,OD260=1.0时,RNA浓度为40μg/ml,稀释时OD260=0.1时,其RNA浓度为4μg/ml。
  纯度分析:纯净的RNA样品其OD260/OD280的比值应介于1.8-2.0。小于此比值说明有蛋白或苯酚污染,如果比值大于2.0,则可能被异硫氰酸胍污染;OD260/OD230比值应大于2.0,如果小于此比值说明有小分子及盐类污染。
  浓度测定:
  使用RNA浓度测定仪,测定样品A260和A280值。根据A260/A280比值,估测RNA质量。一般A260/A280比值在1.8-2.0之间,可以满足实验要求。在100μl RNA原液中取1μl稀释至250μl(DEPC处理的水),测定样品的A260和A280的值,按下列公式计算其浓度:
  RNA原液浓度=A260×稀释倍数×40(ng/μl)。
  测定RNA浓度基本操作步骤:
  1.取1μl RNA原液,放在0.5ml EP管中,加入249μl dd H2O,用移液枪反复混匀。
  2.用dd H2O为空白对照,调节A260零点。
  3.倒掉比色杯中的水,加入稀释并混合均匀的RNA样液,测定A260值。倒掉比色杯中的RNA样液,用dd H2O冲洗比色杯,再调节A280零点。
  4.倒掉比色杯中的水,加入稀释并混合均匀的RNA样液,测定A280值。计算A260/A280比值,比值≥1.8,满足实验要求。
  5.RNA原液浓度=A260×稀释倍数×40(ng/μl)。

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