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小鼠ELISA试剂盒的抗原抗体反应简析

发布时间: 2021-04-13  点击次数: 433次
   小鼠ELISA试剂盒采用双抗体夹心法,单抗包被于酶标板上,标本和标准品中的小鼠试剂会与单抗结合,游离的成分被洗去。加入生物素化的抗小鼠试剂抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素,生物素与亲和素特异性结合;抗小鼠试剂抗体与结合在单抗上的小鼠试剂结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物,若反应孔中有小鼠试剂,辣根过氧化物酶会使无色的显色剂现蓝色,加终止液变黄。在450 nm处测OD值,小鼠试剂浓度与OD450值之间呈正比,可通过绘制标准曲线求出标本中小鼠试剂的浓度。
  小鼠ELISA试剂盒中一般有两次抗原抗体反应,即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间,这一保温过程称为温育,有人称之为孵育,在ELISA试剂盒中似不恰当。
  ELISA试剂盒属固相免疫测定,抗原、抗体的结合只在固相表面上发生。以抗体包被的夹心法为例,加入板孔中的标本,其中的抗原并不是都有均等的和固相抗结合的机会,只有最贴近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体接触。这是一个逐步平衡的过程,因此需经扩散才能达到反应的终点。在其后加入的酶标记抗体与固相抗原的结合也同样如此。这就是为什么ELISA试剂盒反应总是需要一定时间的温育。
  温育常采用的温度有43℃、37℃、室温和4℃等。37℃是实验室中常用的保温温度,也是大多数抗原抗体结合的合适温度。在建立ELISA试剂盒方法作反应动力学研究时,实验表明,两次抗原抗体反应一般在37℃经1-2小时,产物的生成可达顶值。为加速反应,可提高反应的温度,有些试验在43℃进行,但不宜采用更高的温度。抗原抗体反应4℃更为彻底,在放射免疫测定中多使反应在冰箱中过夜,以形成最多的沉淀。但因所需时间太长,在ELISA试剂盒中一般不予采用。

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