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荧光-PCR法的常见应用有哪些?

更新时间:2021-09-18点击次数:729
   荧光-PCR法定量技术一种新的核酸定量技术。该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针或相应的荧光染料来实现其定量功能的。其原理随着PCR反应的进行,PCR反应产物不断累计,荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环,收集一个荧光强度信号,这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化,从而得到一条荧光扩增曲线图。
  荧光-PCR法的应用十分广泛,举例说明一下:
  1.核酸定量分析
  对传染性疾病进行定量定性分析,病原微生物或病毒含量的检测,比如甲型H1N1流感,转基因动植物基因拷贝数的检测,RNAi基因失活率的检测等。
  2.基因表达差异分析
  比较经过不同处理样本之间特定基因的表达差异(如药物处理、物理处理、化学处理等),特定基因在不同时相的表达差异以及cDNA芯片或差显结果的确证。
  3.SNP检测
  检测单核苷酸多态性对于研究个体对不同疾病的易感性或者个体对特定药物的不同反应有着重要的意义,因分子信标结构的巧妙性,一旦SNP的序列信息是已知的,采用这种技术进行高通量的SNP检测将会变得简单而准确。
  4.甲基化检测
  甲基化同人类的许多疾病有关,特别是癌症。一种技术在扩增之前先处理DNA,使得未甲基化的胞嘧啶变成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不受影响,用特异性的引物和Taqman探针来区分甲基化和非甲基化的DNA,这种方法不仅方便而且灵敏度更高。
  5.产前诊断
  人们对遗传性物质改变引起的遗传性疾病还无法治疗,到目前为止,还只能只能通过产前监测,减少病婴出生,以防止各类遗传性疾病的发生,如为减少X连锁遗传病患儿的出生,从孕妇的外周血中分离胎儿DNA,用实时荧光定量PCR检测其Y性别决定区基因是一种无创伤性的方法,易为孕妇所接受。
  6.病原体检测
  采用荧光-PCR检测技术可以对淋球菌、沙眼衣原体、解脲支原体、人类乳头瘤病毒、单纯疱疹病毒、人类免疫缺陷病毒、肝炎病毒、流感病毒、结核分枝杆菌、EB病毒和巨细胞病毒等病原体进行定量测定。与传统的检测方法相比具有灵敏度高、取样少、快速简便等优点。

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