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线粒体异柠檬酸脱氢酶(ICDHm)样本的前处理

发布时间: 2021-08-26  点击次数: 43次

线粒体异柠檬酸脱氢酶(ICDHm)样本的前处理:

组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:

1、 称取约 0.1g 组织或收集 500 万细胞,加入 1mL 试剂一和 10uL 试剂三,用冰浴匀浆器

或研钵匀浆。

2、 将匀浆 600g,4℃离心 5min。

3、 弃沉淀,将上清液移至另一离心管中,11000g,4℃离心 10min。

4、 上清液即胞浆提取物,可用于测定从线粒体泄漏的 α-KGDH(此步可选做)。

5、 在步骤④的沉淀中加入 200uL 试剂二和 2uL 试剂三,超声波破碎(冰浴,功率 20%或

200W,超声 3 秒,间隔 10 秒,重复 30 次),用于线粒体 α-KGDH 活性测定。

测定步骤

1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。

2、 样本测定

(1)在试剂五中加入 18mL 试剂四充分溶解,置于 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)

水浴 10min;现配现用;

(2)在试剂六中加入 1mL 蒸馏水,充分溶解待用;现配现用;

(3)在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 样本、10μL 试剂六和 180μL 试剂五,混

匀,立即记录 340nm 处 20s 时的吸光值 A1 和 2min20s 后的吸光值 A2,计算 ΔA=A2-A1。

内皮细胞分化鞘脂G蛋白偶联受体1抗体

红细胞分化相关因子1抗体

微管相关蛋白样蛋白3抗体

内皮抑素/内皮他丁抗体

雌激素受体β抗体

雌激素受体α抗体

内质网Aβ相关结合蛋白抗体

Ephrin A2抗体

大肠埃希菌菌体蛋白抗体

雌激素硫酸转移酶抗体

E Tag标签抗体

登革热病毒包膜糖蛋白E抗体

食道癌相关基因抗体

EB病毒核抗原抗体-3A抗体

胶质细胞谷氨酸运载蛋白1抗体

转录因子E2F-1抗体

内皮素转化酶1抗体

细胞外基质蛋白1抗体

外胚层发育不良抗体

E2 tag标签抗体

铁螯合酶抗体

DH5α大肠杆菌菌体蛋白抗体

磷酸化丝裂原活化蛋白激酶1/2抗体

上皮细胞粘附分子抗体

酪氨酸蛋白激酶受体B2抗体

表皮生长因子抗体

表皮生长因子受体3抗体

酪氨酸蛋白激酶A4受体抗体

上皮钙粘附分子抗体


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