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C57BL/6小鼠T细胞淋巴瘤细胞;RMA培养的具体无菌技术要点

发布时间: 2021-06-23  点击次数: 168次

C57BL/6小鼠T细胞淋巴瘤细胞;RMA培养的具体无菌技术要点:

1. 实验开始前,无菌室和无菌操作台需要紫外光照射30到60分钟完全灭菌,用70%ethanol擦拭无菌操作台面,并且打开无菌操作台风扇运行10分钟之后,才可以进行实验操作。每次操作只能处理一株细胞株,即使培养基完全相同也不可共用培养基,以避免细胞间污染或失误混淆。实验完成后,请将实验物品拿出工作台,用70%ethanol再次擦拭无菌操作台面。操作间隔应该让无菌操作台运转10分钟到15分钟后,才能进行下一个细胞株的操作。
2. 无菌操作工作的区域应保持清洁和宽敞,必要物品(试管架、吸管、吸取器或吸管盒等)可以暂时放置,其它实验用品使用完毕后应移出,有利于空气流通。实验用品需70%ethanol擦拭后方可带入无菌操作台内。实验操作过程应在台面的中央无菌区域内完成,请勿在边缘非无菌区域进行操作。
3. 小心取用无菌实验物品,避免细菌污染。请勿触碰吸管尖头部和容器瓶口处,也不要在打开的容器正上方进行操作。容器打开后,请用手夹住瓶盖并轻握瓶身,倾斜大约45°角取用,尽量不要将瓶盖口朝上放置于桌面。
4. 工作人员应当首先注意自身安全,必须穿戴齐实验衣和实验手套后才能进行实验。对于病毒感染或是来自人类的细胞株应当特别小心操作,并选择适当等级的无菌操作台进行(至少是Class II)。操作过程中,应避免引起aerosol的产生,小心有毒性药品,例如DMSO和TPA等,并避免针头的伤害等等。
5. 定期检测下列项目:
5.1. CO2钢瓶的CO2压力
5.2. CO2培养箱的CO2浓度、温度、和水盘是否有污染(水盘的水需用无菌水,每周定时更换)。
5.3. 无菌操作台内的airflow压力,定期更换紫外线灯管和HEPA过滤膜,预滤网(300小时/预滤网,3000小时/HEPA)。
6. 水槽内可添加消毒剂(Zephrin 1:750),需定期更换水槽中的水。

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H9c2大鼠心肌细胞(ATCC来源)
C2C12, 小鼠肌原细胞
NIH/3T3, 小鼠成纤维细胞系
大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)
HSC-T6, 大鼠肝星状细胞系
CHO, 中国仓鼠卵巢细胞系
COS-7L, 非洲绿猴肾成纤维细胞
SF9, 昆虫卵巢细胞
BRL 3A, 大鼠肝正常细胞
HK-2, 人肾皮质近曲小管上皮细胞
HET-1A, 人食管上皮细胞
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GC-1, 鼠精原细胞
293A,人胚肾上皮细胞系(腺病毒包装级别)
hDPSCs, 人前磨牙牙髓干细胞
293T, SV40转化的人胚肾上皮细胞系
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HBE, 正常人支气管上皮细胞系
HL-02 [L-02,HL-7702], 正常人肝上皮细胞
HUVEC-12, 人脐静脉血管内皮细胞系
HUM, 正常人主动脉平滑肌细胞
HAVSMC, 人主动脉平滑肌细胞
LX-2, 人肝星形细胞株
3T3-L1, 小鼠前脂肪细胞

 

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