小鼠ELISA试剂盒使用对标准品的稀释与加样

更新时间：2022-05-13

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　　小鼠ELISA试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠白细胞介素水平。用纯化的小鼠白细胞介素8抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素，再与HRP标记的白细胞介素8抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的白细胞介素8呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠白细胞介素浓度。

　　小鼠ELISA试剂盒标准品的稀释与加样：

　　在酶标包被板上设标准品孔10孔，在一、二孔中分别加标准品100μl，然后在一、二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；

　　然后从一孔、二孔中各取100μl分别加到三孔和四孔，再在三、四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；

　　然后在三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到五、六孔中，再在五、六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；

　　混匀后从五、六孔中各取50μl分别加到七、八孔中，再在七、八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从七、八孔中分别取50μl加到九、十孔中，再在九、十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从九、十孔中各取50μl弃掉。

　　加样时分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。